丁芝祥  谭浅  刘双珍  刘丹  李忠庆

中南大学湘雅医院眼科410078

目的：观察2型重组腺相关病毒(rAAV2)载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV1-TK)基因/丙氧鸟苷(GCV)系统对体外培养兔晶状体上皮细胞的杀伤效应，并初步探讨晶状体上皮细胞死亡的机制。

方法：利用携带HSV1-TK基因的2型重组腺相关病毒载体rAAV2/HSV1-TK感染体外培养的兔晶状体上皮细胞N/N1003A，联合使用GCV治疗， MTT法观察不同浓度GCV和作用时间对细胞存活率的影响；将转染了HSV1-TK基因的N/N1003A-TK细胞与正常N/N1003A细胞按不同比例混合培养，观察旁观者效应；以不同感染复数(MOI)的重组病毒rAAV2/HSV1-TK转染N/N1003A细胞，观察MOI对HSV1-TK/GCV系统杀伤效应的影响。应用透射电镜观察、Hoechst33258染色等方法观察细胞凋亡、坏死改变，流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化。

结果：实验组各浓度GCV作用下的细胞存活率与对照组比较差异均有显著的统计学意义(P<0.01)，实验组GCV的IC50为2mg/L，对照组IC50为524mg/L，治疗指数为262。N/N1003A-TK细胞的存活率随GCV的作用时间延长而下降；N/N1003A-TK细胞与正常细胞混合培养，N/N1003A-TK细胞占10%时，混合细胞存活率仅51.47%±1.44%； GCV对细胞的杀伤效应随着MOI的升高而增加。N/N1003A-TK细胞在GCV作用下出现明显的细胞凋亡现象，细胞的凋亡率7.18%±2.04%，与对照组(3.50%±0.56%)比较差异有统计学意义(P<0.01)。

结论：GCV可有效杀伤重组腺相关病毒rAAV2/HSV1-TK转染的晶状体上皮细胞，并具有较强的旁观者效应；HSV1-TK/GCV系统引发的细胞死亡可能与凋亡及坏死两种机制有关。重组腺相关病毒载体介导的自杀基因疗法有可能成为后囊膜混浊的有效治疗方法。

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