基础             1995                                      PO0140

    牛磺酸体外诱导脐血间充质干细胞分化为感光细胞的实验研究

    金玮 杨安怀 邢怡桥

    武汉大学人民医院眼科 430060

    目的：建立一种人脐血源性间充质干细胞(MSCs)体外增殖的方法，探讨牛磺酸将其诱导分化为感光细胞的实验条件、并鉴定其生物学特性。

    方法：从正常分娩的足月胎儿脐血中分离出MSCs进行原代培养，培养瓶预先用自体血浆包被处理。72～96h半量更换培养液，弃去未贴壁的细胞，以后每3～5d半量换液1次。待细胞达到80％～90％融合时，按1：2的比例进行传代。倒置或相差显微镜下每日观察原代和传代细胞的生长情况和形态学特征。取P3代脐血MSCs用流式细胞仪（FCM）检测细胞周期和细胞表面分子CD29、CD34、CD44、CD45的表达。取孵育3～4周细胞融合达90％的原代MSCs，弃去原基础培养基，换成最小必需培养基（含1％FBS，青霉素G100U/ml、链霉素100ug/ml、牛磺酸50nmol/L）继续培养8～10d，固定后用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的二抗生物素蛋白链霉素标记，荧光显微镜观察其与一抗微管相关蛋白2（MAP2）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、视紫红质（RHOS）、蛋白激酶C(PKC)、细胞视黄酸结合蛋白（CRABP）、巢蛋白(nestin)抗体复合物的表达。

    结果：脐血经分离、培养5～7d后有间充质样细胞贴壁，3～4周后，细胞生长达80％～90％融合，形态学类似骨髓源性MSCs。连续传至5代以后，增殖能力未见明显减弱。脐血MSCs的大部分细胞（＞90％）处于G0/G1期，且均一稳定地表达间充质干细胞的相关抗原CD29、CD44但不表达CD34、 CD45和HLA-DR。经牛磺酸体外诱导后的MSCs RHOS、CRABP1、nestin有阳性表达，而PKC、GFAP、MAP2不表达。

    结论：脐血中含有MSCs，用牛磺酸体外诱导后能使其部分向神经细胞转化，该技术有望为视网膜损伤性疾病的修复提供新的种子细胞。

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