角膜结膜及泪器病             2087                                      PO0308

　　bFGF、EGF和NGF对体外培养的人角膜内皮细胞生长调控的初步研究

　　邵应峰 陈家祺 张雪菲 许丽英  顾建军 孟繁剑

　　广州中山眼科中心 510060

　　【目的】 探讨不同浓度下Bfgf、EGF和NGF对体外培养的人角膜内皮细胞生长调控的作用。

　　【方法】
 
　　1.研究材料：体外培养，生长良好的2－4代人角膜内皮细胞。

　　2.分组：取96孔板3块，每块96孔板分别进行如下操作：以含8％FBS的DMEM/F12(1:1)混合培养液200μl的3孔为空白对照组。其余各孔接种角膜内皮细胞，每孔约3×103个。用含8％FBS的DMEM/F12(1:1)混合培养液培养24小时后更换培养液。分别加入含0ng/ml、1ng/ml、3ng/ml、10ng/ml、30ng/ml、100ng/ml的EGF、Bfgf、NGF的相同培养基200μl，每种生长因子每种浓度重复3孔，隔天换液。培养48小时后检测。

　　3.检测：MTT法。每孔加入5mg/ml MTT的溶液20μl，继续培养4小时。弃去培养液。每孔加入DMSO200μl，37℃下摇匀，10分钟。选择波长570检测光源，波长630为校正光源，用酶标仪进行检测。

　　4.统计分析：SPSS 13.0软件，配对资料的t检验。

　　【结果】

　　1.Bfgf对角膜内皮细胞生长的影响：0ng/ml、1ng/ml、3ng/ml、10ng/ml、30ng/ml、100ng/ml浓度下平均OD值分别为：0.224±0.045、0.239±0.040、0.262±0.0342、0.278±0.0319、0.281±0.0324、0.260±0.0310

　　2.EGF对角膜内皮细胞生长的影响：0ng/ml、1ng/ml、3ng/ml、10ng/ml、30ng/ml、100ng/ml浓度下平均OD值分别为：0.228±0.0304、0.245±0.0418、0.267±0.0454、0.275±0.0347、0.271±0.0449、0.250±0.0253

　　3.NGF对角膜内皮细胞生长的影响：0ng/ml、1ng/ml、3ng/ml、10ng/ml、30ng/ml、100ng/ml浓度下平均OD值分别为：0.216±0.0187、0.228±0.0226、0.231±0.0225、0.242±0.0279、0.245±0.0294、0.247±0.0349

 　　【结论】

　　1.Bfgf在10ng/ml范围内对内皮细胞生长有促进作用，并具有剂量依赖性。高于30ng/ml时有抑制作用。

　　2.EGF在3ng/ml范围内对内皮细胞生长有促进作用，并具有剂量依赖性。高于30ng/ml时有抑制作用。

　　3.NGF本次实验剂量范围内对角膜内皮细胞生长无明显作用。

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