角膜结膜及泪器病             2085                                      PO0306

　　用角膜移植术后残留的供体角膜进行人角膜内皮细胞培养的研究

　　邵应峰 胡诞宁 陈家祺

　　广州中山眼科中心 510060

　　【目的】探讨用角膜移植术后残留的供体角膜进行人角膜内皮细胞培养的条件、方法。

　　【材料与方法】

　　1.研究材料：⑴用于内皮培养的角膜移植术后残余供体组织的选择标准的确立：美国NEW YORK EYE & EAR INFIRMARY手术室提供的保存于Optisol中的角膜移植术后的残余供体172例。

　　2.内皮细胞分离方法：后弹力膜剥离＋贴皿培养。

　　3.培养条件：DMEM/F12(1:1)混合液，含15％胎牛血清，10ng/ml EGF，10ngml bFGF，三抗。

　　4.观察指标：供体年龄（AGE）、供体保存与死亡时间间隔（IBDP）、供体采集与死亡间隔（IBDC）、是否曾在常温下过夜（RON＝1和NRON＝0）。

　　5.细胞培养评分标准：

　　6－传代3次以上

　　5－原代细胞多，可以传代

　　4－原代细胞多，难以计数，但不足以传代

　　3－原代细胞少，可用肉眼计数

　　2－仅在后弹力膜上有细胞生长

　　1－后弹力膜上有细胞，但不生长

　　0－后弹力膜上无细胞或培养时脱落死亡

　　以3分以上为适宜培养标准。

　　6.统计分析：SPSS 13.0软件，相关和逻辑回归分析，t检验。

　　【结果】 细胞培养评分与供体年龄呈负相关，相关系数为－0.319，p<0.01；与细胞采集与死亡间隔呈负相关，相关系数为－0.229，p<0.01；与是否在常温下过夜呈负相关，相关系数为－0.343，p<0.01；与供体保存与死亡时间间隔，相关系数无统计学意义。

　　【结论】 用角膜移植术后残留的供体角膜进行人角膜内皮细胞培养，宜选用供体年龄在40岁一下，供体角膜保存在15天以内，未在室温下过夜的材料。

　　本研究受：凯思奖学金海外研究资助项目

　　卫生部临床重点项目

　　985项目二期资助

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