角膜结膜及泪器病             2071                                      PO0302

　　深低温冷冻长期保存角膜的实验研究

　　贾艳红 王丽娅 赵承彦 杜连心

　　河南省眼科研究所   450003

　　【目的】研究程序控制降温仪保存角膜，提高角膜内皮细胞存活率。

　　【方法】供体角膜经过冷冻预处理四步法：由二甲基亚砜、蔗糖、胎牛血清三种成份配成四种不同浓度梯度的冻存液，剪取带巩膜缘1-2mm的角膜片分别在上述四种保存液中预处理30分钟后移入程控降温仪中。然后用程控降温仪三阶段四步法梯度降温至-80℃最后放入液氮-196℃长期保存。四种不同程序降温方法:+4℃保持10分钟后，以①：第一阶段2℃/min降至-18℃保持10分钟；第二阶段5℃/min降至-80℃保持10分钟。然后改变降温速率②:第一阶段2℃/min降至-18℃，第二阶段 9℃/min降至-80℃ ；③:第一阶段2℃/min降至-18℃， 第二阶段2℃/min降至-80℃；④: 第一阶段1℃/min降至-18℃，第二阶段5℃/min降至-80℃。复苏后0.25%的胎盘蓝和0.4%的茜素红联合染色，2.5%戊二醛固定行镜下形态学观察并计算内皮细胞密度存活率，并进行统计学分析。

　　【结果】镜下观察第①种方法好,细胞间隙稍有所扩大但细胞轮廓清晰，计数细胞的存活率达到70%以上。

　　【结论】应用程序降温仪进行深低温冷冻保存角膜，能很好的控制降温速率,进行梯度降温时不至于过快，并且降温阶段可以保证使细胞迅速跨过-20℃～-60℃这个最易损伤细胞的温度区。因此长期保存供体角膜能取得良好的效果,可在眼库中推广使用。

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