角膜结膜及泪器病             2091                                      PO0310

　　正常人角膜缘上皮细胞系的建立

　　刘敬波，王智崇*，宋革，黄冰，高前应，刘炳乾，胥莹，熊翠菊，马宁，周扬，梁轩伟，王凌华，葛坚*

　　广州中山眼科中心  510060

　　目的 通过体外连续传代培养，建立具有正常生物学特性和功能的人角膜缘上皮细胞系，为组织工程化角膜的构建提供种子细胞。

　　方法 原代培养人角膜缘上皮细胞，体外连续传代建系。观察细胞形态学（光镜和电镜）、细胞生长曲线（MTT法）、细胞周期（流式细胞术）、克隆率（有限稀释法）、蛋白表达（细胞免疫荧光染色）、染色体核型、致瘤性、复层形成能力等特征。

　　结果 利用组织块培养法成功建立了人角膜缘上皮细胞系，传代超过50代，细胞呈卵圆形，表面丰富的微绒毛，胞浆内可见大量的粗面内质网，核糖体，微丝，微管；倍增时间为19.9小时，克隆形成率为5% - 6%；2代前细胞表达转录因子P63和跨膜蛋白ABCG2，建系细胞表达角质蛋白3、14、19，Vimentin、 F-actin和β-tubulin，细胞增殖细胞核抗原（PCNA）；建系细胞呈多倍体，异倍体核型；裸鼠皮下细胞接种80后无致瘤性；气液界面培养细胞2周，可形成4-5层复层角膜上皮。

　　结论 采用非基因转染的方法，在体外成功建立了人角膜缘上皮细胞系，并保持了细胞的高增殖活性和分化潜能，为组织工程化生物角膜的构建及角膜上皮细胞研究提供了细胞来源。

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