郑建秋  刘平  付松滨

哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科医院150001

目的：克隆一个先天性遗传性核性白内障家系致病基因Val64Gly突变型mGJA8，研究该基因野生型和突变型在体外真核细胞系中的表达。探讨新生突变所致白内障表现型同遗传型的相关性。

方法：将致病基因突变型和野生型，构建pEGFP-N1- GJA8重组表达质粒，然后用限制性内切酶消化和DNA测序鉴定。将携带绿色荧光蛋白重组表达质粒pEGFP-N1-wt hCx50和pEGFP-N1-hCx50V64G，分别在体外转染真核细胞，用荧光显微镜观察蛋白表达情况。

结果：经酶切和DNA序列测定鉴定证实pEGFP-N1- GJA8重组质粒构建成功。荧光显微镜观察w GJA8和m GJA8目的基因均成功表达，pEGFP-N1-wt hCx50在细胞膜上表达，pEGFP-N1-hCx50V64G在细胞质中表达。立体三维结构显示第64位氨基酸结构改变。

结论：成功克隆先天性白内障致病基因， 成功完成了致病基因在真核细胞中的蛋白表达的情况，并为研究突变基因的氨基酸改变产生的蛋白结构改变，导致相应临床表现型提供了重要依据。

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