角膜结膜及泪器病             2369                                      PO0330

　　脱细胞角膜基质的制作及其物理学特性评价

　　周杨 王智崇* 刘敬波 刘炳乾 梁轩伟 熊翠菊 马宁 喻平平 李乃洋

　　广州中山眼科中心 510060

　　目的 探索应用不同方法制备脱细胞角膜基质的方法，为组织工程角膜的构建提供支架材料，同时为临床角膜移植提供理想的供体。

　　材料与方法 将新鲜离体的猪全层角膜片浸入不同浓度的SDS、TritonX-100中在不同温度、不同作用时间下处理，实验共分4个系列组：0.1%SDS、0.25%SDS及0.5%SDS在4℃下分别作用6小时、12小时及24小时；0.25% TritonX-100及0.5% TritonX-100在4℃下分别作用6小时、12小时及24小时；0.1%SDS在37℃下分别作用6、7、8、9及10小时；0.05%SDS在4℃下分别作用12小时、24小时、36小时、48小时、60小时及72小时；通过光镜、电镜观察上述方法脱细胞的程度、对基质胶原排列的影响；选取20只脱细胞角膜植片，对植片的物理特性进行分析，测定其吸水率、透光度并与正常角膜植片对比，观察处理前后对角膜吸水率、透光度的影响；新西兰大白兔10只，将制备的脱细胞角膜基质植入兔角膜基质层间，以对侧健眼作为对照组，每日观察植片透明度的恢复、炎症反应及免疫排斥的情况。

　　结果 1、以浓度为0. 1%的SDS在37℃下持续作用7小时即可将角膜的上皮层细胞和基质内的细胞完全脱去，同时保持角膜基质层胶原正常的排列；光镜、电镜结果亦显示植片内无细胞结构，胶原纤维排列整齐、结构完整。故此，选取该组作用条件作为后续实验材料的处理方法。2、吸水率测定结果显示，经过脱细胞处理后的角膜植片在复水1小时之内吸水率增加最为明显，1小时测得的吸水率为449.05%，而正常角膜在复水1小时之内吸水率上升的速度也最快，1小时测得的吸水率为463.25%，二者相比没有统计学差异，p＞0.05；测定405、490、560、630以及780nm波长时处理组角膜基质的透光率，与正常组相比差异均无显著性，p＞0.05；3、植入术后3周植片完全透明，其中2只角膜于切口处长入新生血管，余术后眼表均未见炎症反应、新生血管形成及免疫排斥反应发生。

　　结论 以0. 1%的SDS在37℃下作用7小时处理后的角膜植片，去除了异种材料的细胞成分，极大程度地降低了材料的抗原性，可为临床角膜移植提供理想的供体植片；同时，最大限度地保存了角膜基质的支架结构，对其进一步进行力学以及生物学特性的评价对于角膜组织工程构建人工角膜具有重要意义。

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