蒋永祥 卢奕 杨晋
复旦大学附属眼耳鼻喉科医院200031
目的:探讨Cre/loxP系统能否增强人晶状体上皮细胞(HLEC)特异性启动子LEP503调控的自杀基因系统高效靶向抑制HLEC增殖作用。
方法:构建Cre/loxP增强型慢病毒介导HLEC特异性启动子LEP503调控的HSV-tk系统即Cre/LoxP增强型表达载体组合(包括调控载体Lenti-lep503-HSVtk-cre和靶载体Lenti-hPGK-loxp-EGFP-loxp-HSVtk)。以HLEC,Hela,RPE为研究细胞分别转入广谱表达载体,特异性表达载体和增强型特异性表达载体组合,观察不同细胞组荧光强度,判断其组织特异性表达情况。不同浓度GCV作用后,利用CCK-8、流式细胞仪等检查,判断细胞杀伤作用。
结果:增强型特异性启动子在Hela,RPE细胞中表达EGFP,在HLEC中不表达EGFP。20ug/ml GCV对细胞有明显的杀伤作用,流式细胞仪检测,增强型特异性表达载体组合共感染细胞凋亡为75.65%。
结论:Cre/loxP增强型表达载体组合在HLEC中的特异表达;GCV作用下能高效靶向抑制HLEC增殖。
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