青光眼 2765 PO0537
前列腺素PGF2α类抗青光眼药Travatan对培养睫状肌细胞中 NF-κB的表达的实验研究
肖剑晖，蓝育青,郑健墚，张弛，彭蔚，夏朝霞，郭慧 通讯作者：蓝育青
中山大学附属第二医院 510120
青光眼目前已成为世界范围内第二位不可逆致盲性眼病。研究青光眼的多中心临床随机对照试验结果表明，个体化眼压正常调控治疗仍然是目前阻止病程进展的最有效手段。临床上青光眼眼压升高绝大部分是因房水外流阻力增加所致。葡萄膜巩膜房水流出途径是房水的两条重要排出途径之一，因此，研究葡萄膜巩膜房水流出通道的分子调控机制，进一步了解青光眼的发病机理，丰富青光眼房水流出作用机制理论，为青光眼的治疗提供新的、强有力的手段。
研究目的：观察前列腺素PGF2α类抗青光眼药Travatan作用下，核转录因子NF-κB及IκB系统对葡萄膜巩膜房水外流的分子调控，力图阐明葡萄膜巩膜房水外流的分子调控机制。
研究方法：1、体外培养人睫状肌细胞并鉴定。2、人睫状肌细胞培养基中加1μM 曲伏前列腺素Travatan，根据孵育时间的不同分为4组，即0hr组（对照组）、6 hr组、12hr、24hr组。孵育至上述时间点时，分别收取细胞孵育液及细胞，real-time RT-PCR、和免疫荧光半定量分析分别检测上述时间组NF-κBp65、IκBα在基因和蛋白水平的表达。
研究结果：
1、人睫状肌细胞培养和鉴定
细胞用Smooth muscle α-actin 和Desmin 免疫荧光反应均可见阳性物质分布于胞浆中。形态学和免疫荧光鉴定证明所培养的细胞是人睫状肌细胞。
2、real-time RT-PCR 法分别检测NF-κBp65、IκBα在不同时间组的基因表达
mRNA相对定量结果用LSD-t检验统计分析显示与对照组比较6hr、12hr、24hr组 NF-κBp65均表达下降（p=0.001）；IκBα荧光强度6hr组、12hr 组较对照组改变不明显（p>0.05），24hr组较对照组增加（p=0.000）。
3、免疫荧光半定量分析
相同曝光时间、相同面积下对照组和各实验组的细胞荧光染色强度应用LSD-t test统计软件分析表明：NF-κBp65荧光强度6hr、12hr、24hr组均较对照组减少（p=0.000）；IκBα6hr组较对照组没有明显改变（p=0.134）、12hr 组较对照组轻微下降（p=0.032），24hr组较对照组明显增加（p=0.001）。
实验结论：曲伏前列腺素作用于人睫状肌细胞后， NF-kB p65的基因表达下调， IκBα的基因表达上调。NF-kB在葡萄膜巩膜房水流出通道中起负调控作用。
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