FK-506抑制大鼠角膜移植免疫排斥反应的研究
中华眼科杂志 1999年第1期第35卷 眼表疾病
作者：吕岚 张文华 孙旭光
单位：吕岚（100730 首都医科大学附属北京同仁医院眼科）；张文华 孙旭光（北京市眼科研究所）
关键词：大鼠；角膜移植；穿透性；移植物抗宿主反应；FK-506
【摘要】 目的 建立近交系大鼠穿透性角膜移植动物模型，观察结膜下注射FK-506对角膜移植免疫排斥反应的抑制作用。方法 将近交系Lou大鼠28只作受体，14只F344大鼠作供体，分为3组，术后结膜下分别按每公斤体重注射0.1 mg FK-506、3 mg CsA及生理盐水，共2周。对角膜植片进行临床观察，以混浊、水肿和新生血管3项指标作为临床评估标准。结果 3组角膜植片的存活时间分别为(22.1±5.17)、(18.4±1.4)及(12.1±2.13)天，三者间差异有显著性(P＜0.01)。结论 FK-506能显著延长大鼠角膜植片的存活时间，是一种有效的新型免疫抑制剂。
Experimental studies on the effect of the immunosuppressant FK-506
on penetrating keratoplasty rejection model in rats
L Lan*, ZHANG Wenhua, SUN Xuguang.
*Department of Ophthalmology, Affiliated Tong Ren Hospital,
Capital Medical University, Beijing 100730
【Abstract】 Objective To study the immunosuppressive effects of FK-506 on allogeneic transplantation in a rat model.Methods Inbred strain Lou rats were used as recipients, and F344 rats were used as donors. Subconjunctival injection of FK-506 0.1 mg/kg and cyclosporine A (CsA) 3 mg/kg were administered respectively for 2 weeks, and the grafts were inspected by clinical evaluation.Results The group receiving FK-506 had a significant delay in allograft rejection with mean survival time (22.1±5.17) days vs. (18.4±1.4) days for the CsA group and (12.1±2.13) days for the control group (P＜0.01).Conclusion It is indicated that FK-506 would be a useful drug to suppress corneal graft rejection.
【Key words】 Rats Keratoplasty, penetrating Graft vs host reaction FK-506
免疫排斥反应是导致角膜移植手术失败的首要原因［1］，应用免疫抑制剂是其主要的治疗方法，皮质类固醇是较常用的药物［2］，但其治疗效果却不尽如人意，对于高危患者，激素治疗常常无效。近年来应用环胞霉素A(cyclosporine A，CsA)使角膜移植的预后有所改观，但排斥反应仍有发生［3］。因此，新型高效免疫抑制剂的研究具有重要意义。
FK-506是一种新型免疫抑制剂，其免疫抑制作用强于CsA［4，5］。我们应用大鼠建立穿透性角膜移植(penetrating keratoplasty,PKP)动物模型，研究FK-506对角膜移植免疫排斥反应的抑制作用。
材料和方法
一、实验动物
选用近交系大鼠(Lou，RT1U)28只作受体，与其主要组织相容性系统完全不同的另一近交系大鼠(F344，RT1V)14只作供体。供、受体均为雌性，体重150～200 g，年龄2～3个月。受体动物右眼接受角膜移植，供体双眼取材后处死。实验动物购自中国医学科学院动物研究所。
二、手术方法
参照Williams等［6］方法，术前15分钟以1%阿托品滴眼液和美多丽-P(0.5%托品酰胺，0.5%盐酸新福林)散瞳，腹腔内注射2.5%硫贲妥钠10～15 mg/kg麻醉。手术在显微镜下进行。首先于供体角膜钻取直径3.5 mm植片，于受体右眼行PKP，用直径3.0 mm环钻钻除中央区角膜,将植片置于植床，以10-0尼龙线间断缝合8针，线结不埋藏。术毕散瞳，结膜下注射庆大霉素2 000 U，睑缘缝合。
三、药品
FK-506结晶系日本Fujisawa医药公司惠赠，使用前溶入生理盐水中制成混悬液。CsA系瑞士Sandoz药厂产品，使用前用生理盐水稀释。
四、治疗方案
FK-506组10只大鼠，自手术当天开始连续右眼结膜下注射0.1 mg/kg FK-506，共2周；CsA组8只大鼠作为阳性对照，结膜下注射3 mg/kg CsA，用法同前；阴性对照组10只大鼠，结膜下注射生理盐水。所有动物术后均连续结膜下注射庆大霉素2天，0.25%氯霉素及美多丽-P滴眼，每天1次，共1周。
五、临床观察
自术后第1天开始，Lou大鼠每天经乙醚麻醉后在裂隙灯下观察直至排斥反应发生。以后每周观察2或3次，连续观察2～4周。同时观察其角膜植片，并对角膜混浊、水肿及新生血管3项指标进行评分，评分参照Holland等[7]方法，3项评分之和为当日排斥反应指数(rejection index，RI)，当RI≥6时，视为排斥反应发生。术后有严重前房出血、虹膜广泛前粘连、伤口裂开及植片感染的大鼠均在本研究之外。
六、实验结果的统计学方法
本文数据采用计算机Systat统计软件进行方差分析，对方差不齐者先用以10为底的对数进行转换后再行方差分析。
结果
一、植片存活时间
FK-506、CsA和对照组大鼠角膜植片存活时间分别为(22.1±5.17)、(18.4±1.41)和(12.1±2.13)天。统计结果表明，FK-506和CsA均能明显延长角膜植片的存活时间，与对照组相比差异有显著性(P＜0.01)，且FK-506的作用优于CsA(P＜0.01)。
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