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3讨论
端粒酶作为绝大多数恶性肿瘤的标记物，已在绝大多数恶性肿瘤中检测到高度表达[1]，而大多数正常组织中缺乏，使得从抑制端粒酶活性入手，开创新型的抗肿瘤疗法成为可能，并有望为恶性肿瘤的治疗寻找到新的突破口。研究表明，去除端粒酶的活性，癌细胞的端粒将逐渐缩短并失去其无限增殖能力[2,3]。脉络膜黑色素瘤是成年人最常见的眼内恶性肿瘤，由脉络膜内黑色素细胞或色素痣恶变而来。因其恶性度高，疗效差，目前仍有40%～50%的死亡率[4]，故探索新的、有效的治疗方法，一直是其研究的热点。我们的研究已表明，93.3%的葡萄膜黑色素瘤中端粒酶呈高表达，故抑制其端粒酶活性，有可能为葡萄膜黑色素瘤的治疗寻求新的方法。近年来的研究表明，IFNα 2b具有降低端粒酶活性的作用，成为一种新型的端粒酶抑制剂，也为其抗肿瘤作用的原理增加了新的佐证。我们发现，葡萄膜黑色素瘤细胞的端粒酶活性随着IFNα 2b的药物浓度的增加而逐渐降低，在50kU/L的浓度之前，端粒酶活性仅略微下降，而达到500kU/L后即出现显著的下降趋势，5000kU/L之后即维持在低水平。与此同时，我们在研究中发现，细胞在IFNα 2b浓度达到500kU/L之后即出现大量死亡，但细胞端粒酶活性的明显降低出现在50kU/L的浓度点上，表明端粒酶活性的下降先于细胞的死亡，细胞端粒酶活性的降低有可能是细胞死亡的原因。在5000kU/L的固定浓度时，随着作用时间的延长，其端粒酶活性及细胞抑制率出现与浓度梯度相似的变化，端粒酶活性在24h出现明显下降，在72h其下降趋势逐渐趋缓，其活性维持在低水平，但两种方法均未能使端粒酶活性完全消失。从凝胶电泳的图象可以看出，随着药物浓度及作用时间的增加，端粒酶的显影条带越来越少，在浓度达到50kU/L以上及时间达到24h后，端粒酶活性条带均降低到4条以下，清楚地显示出其抑制作用。降低端粒酶活性的机制，目前尚不十分清楚，但可能与其能影响端粒酶的催化亚基—端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase, hTERT）及cMyc基因有关。研究表明，cMyc基因的高表达对hTERT的表达有至关重要的影响[5,6]，而hTERT的高表达又可引起端粒酶活性的增高。Wang等[7]用反转录病毒将cMyc基因转至人上皮细胞中，结果发现其hTERT水平增高了50倍。而Akiyama等[8]及孟志强等[9]发现，IFNα 2b可有效降低Daudi细胞中及肝癌细胞cMyc基因的水平，因此，IFNα2b降低葡萄膜黑色素瘤细胞的端粒酶活性很可能是通过cMychTERT端粒酶这样一个作用轴来完成。最近人hTERT的结构和hTERT基因已被识别[10,11]，发现在hTERT基因5′端的部分启动子编码中包含有数个cMyc蛋白联结的位点(EBox)，转染表达cMyc的质粒后，hTERT的表达大大提高，而端粒酶活性也升高，这说明hTERT基因是cMyc转录的目标[12]。但干扰素对癌细胞的作用机制很复杂，细胞表面存在着干扰素的受体，干扰素通过与受体结合，对多种细胞因子产生调节作用，包括生长因子、蛋白激酶和酪氨酸激酶、信号传递过程及诱导分化等，且有文献报道IFNα 2b对细胞周期也有影响，因此亦可能存在另外的机制。
图1IFNα 2b对端粒酶的影响 （略）
A：干扰素浓度50000,5000,500,50,5,0kU/L;B：作用时间
IFNα 2b是由白细胞产生的具有抗增殖活性的细胞因子，是肿瘤生物治疗中重要的免疫调节剂。目前利用基因工程重组的人干扰素已广泛应用于病毒性疾病和恶性肿瘤的治疗中。近年来已陆续有研究从其降低端粒酶的角度来剖析其对全身恶性肿瘤的治疗作用及作用机制。本研究表明，IFNα 2b作为一种端粒酶抑制剂，可有效降低脉络膜黑色素瘤细胞端粒酶活性，从而抑制肿瘤细胞的生长，有望为脉络膜黑色素瘤的临床化疗提供更多的理论依据和思路。
【参考文献】
1张帆，吴晓梅. 眼睑皮肤恶性黑色素瘤早期检测进展.国际眼科杂志 2007;7(2):493 495
2 Kondo S, Tanaka Y, Kondo Y, et al. Antisense telomerase treatment: induction of two distinct pathway apoptosis and differentiation. FASEB 1998;12(10):801811
3 Dahse R, Fiedler W, Ernst G. Telomeres and telomerase: biological and clinical importance. Clin Chem1997;43(5):708714
4吴中耀.现代眼肿瘤眼眶病学.北京：人民军医出版社2002：204241
5钱劼靖，金洁.干扰素α联合高三尖杉酯碱下调K562细胞端粒酶逆转录酶及端粒酶活性诱导细胞凋亡.中国病理生理杂志2006;22 (9)： 17471750
6 Cong YS, Wen J, Bacchetti S. The human telomerase catalytic subunit hTERT: organization of the gene and characterization of the promoter. Human Mol Genet1999;8(1):137142
7 Wang J, Xie LY, Allan S, et al. Myc activates telomerase. Gene Dev1998;12(12):17691774
8 Akiyama M, Iwase S, HoriguchiYamada J, et al. Interferonalpha repressed telomerase along with G1accumulation of Daudi cells. Cancer Letters 1999;142(1):2330
9孟志强，吴红梅，陈震.干扰素对肝癌细胞端粒酶活性及cMyc蛋白的影响.上海医学2001;24（3）：137139
10 Horikawa I, Cable PL, Afshari C, et al. Cloning and characterization of the promoter region of human telomerase reverse transcriptase gene. Cancer Res1999;59(4):826830
11 Greenberg RA, OHagan RC, Deng H, et al. Telomerase reverse transcriptase gene is a direct target of cMyc but is not functionally equivalent in cellular transformation. Oncogene1999;18(5):12191226
12 Wu KJ, Grandori C, Amacker M, et al. Direct activation of TERT transcription by cMyc. Nat Genet1999;21(2):220224 上一页 [1] [2] |
