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3讨论
31Ⅰ型胶原cDNA片段本研究所克隆的Ⅰ型胶原cDNA片段，是在建立白内障与正常晶状体上皮细胞差异表达cDNA文库的过程中发现的.而所谓的差异表达文库，是消除了正常组的mRNA而剩余的差异基因，应为白内障组特有而正常组没有或白内障组高表达、正常组低表达的基因.经测序，发现Ⅰ型胶原cDNA片段存在于该文库中，故理论上Ⅰ型胶原基因应为白内障组特有而正常组没有或白内障组高表达而正常组低表达基因.本研究克隆到Ⅰ型胶原cDNA片段，为长600 bp的片段，经与GenBank比较，同源性为999%，可以利用来作为探针，进行进一步的杂交研究.
32Ⅰ型胶原在正常及白内障晶状体上皮的表达Ⅰ型胶原作为一种纤维性胶原，它在细胞的增殖以及组织的疤痕化中起重要作用.有研究发现，前极性白内障的混浊斑块中，存在有Ⅰ型胶原蛋白［2］.晶状体上皮细胞作为晶状体中惟一有分裂活性的细胞，它能分裂分化出晶状体纤维并产生晶体蛋白，能合成基底膜样物质、以及糖胺多糖等细胞外基质，在白内障的发生以及白内障术后晶体后囊混浊中，其作用不可忽视.许多研究证明，体外培养的晶状体上皮细胞具有合成Ⅰ型胶原蛋白的能力［3］；对培养的人晶体上皮细胞的研究，也发现了Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原前mRNA的表达［4］；另外，利用X射线衍射技术和免疫组化技术，有人在牛和人的晶状体囊膜的研究中也发现了Ⅰ型胶原的存在［5、6］，由于晶状体囊膜的成分是由晶状体上皮细胞合成的，故人晶状体上皮可能具有合成Ⅰ型胶原的能力.这些均说明晶体上皮细胞存在Ⅰ型胶原mRNA的表达，具有合成Ⅰ型胶原蛋白的能力.但直接利用人晶状体囊膜标本和原位杂交技术，研究Ⅰ型胶原mRNA在人正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的分布，并比较二者的差异，目前尚未见报道.本研究首次用原位杂交方法证明，Ⅰ型胶原mRNA存在于正常和年龄相关性白内障晶状体上皮的细胞浆中，说明Ⅰ型胶原基因在正常和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中均有表达.其在正常晶状体上皮细胞中的作用可能参与了细胞外基质的形成和晶体囊膜的代谢.
关于Ⅰ型胶原与年龄相关性白内障的关系，目前报道很少.Lee［7］等利用RTPCR技术，发现前极性白内障晶状体上皮细胞中Ⅰ型胶原mRNA高表达，在核性和皮质性白内障中未见差异表达.在前面的实验中本研究曾筛出其为高表达基因，但通过对原位杂交结果的半定量分析，发现Ⅰ型胶原基因在皮质性年龄相关性白内障和正常晶状体上皮细胞中的表达差异并不明显，这与Lee等的研究相吻合.由于实验方法的不同，实验标本之间的误差，造成结果的不一致，其是否参与了年龄相关性白内障的发病，目前仍不能下定论.对Ⅰ型胶原在晶状体上皮的作用及其与年龄相关性白内障发病的关系仍需今后进一步的研究与验证.后发性白内障是影响白内障术后视力提高的重要原因，目前的研究认为，后囊混浊的发生，与白内障术后残留的晶体上皮细胞的移行、增殖与化生有关.Shige［8］等发现，白内障术后由于纤维化引起的后囊混浊中，存在有纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原等成分.本研究在白内障以及正常晶状体上皮细胞中均发现有Ⅰ型胶原的表达，且二者表达程度差异不大，说明Ⅰ型胶原在白内障晶体上皮细胞中表达活跃，其对于白内障术后后囊混浊的形成可能起重要作用.但仍缺乏直接证据，有待于今后进一步的研究与验证.
【参考文献】
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［8］ Shige MM,Majima Y,Shimizu Y.Immunohistochemical studies on factors involved in after cataract［J］.Nippon Gakkai Zasshi,1998;102:503. 上一页 [1] [2] |
