【摘要】 目的 探讨中药制剂（制何首乌、北沙参、紫丹参）防止晶状体衰老的作用机制。方法 30只2个月龄雄性大鼠，其中10只为正常对照组，20只用D-半乳糖每日皮下注射制成衰老模型，其中10只为衰老模型组，另10只用制何首乌、北沙参、紫丹参3味药制成的口服液灌胃，40日后应用荧光光谱法检测各组大鼠晶状体组织中水溶性荧光物质（WSFS）的含量。结果 WSFS的含量：正常对照组（321.17±8.08）单位,衰老模型组（501.11±6.35）单位，中药治疗组（397.65±8.27）单位。衰老模型组与中药治疗组、正常对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01）,而中药治疗组与正常对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 制何首乌、北沙参、紫丹参3味药制剂对衰老晶状体具有抗氧化损伤的作用。
【关键词】 制何首乌；北沙参；紫丹参；晶状体；氧化损伤；大鼠
Experimental study on the effect of traditional chinese medicine on preventing and curing aging cataract
【Abstract】 Objective To study the effect of Radix Polygonum Multiflorum Preparata, Radix Glehniae and Radix Salviae Miltiorrhizae in inhibiting cataract. Methods Aging models were made by hypodermic injection of D-galactose into the 2-month-old rats' back of the neck. Give the rats gastric infusion with the decoction of Radix Polygonum Multiflorum Preparata, Radix Glehniae and Radix Salviae Miltiorrhizae. The content of water-soluhie fluorescent substance （WSFS） in the aging lens was detected after 40 days. Results The content of WSFS in the aging lens in Herbs Cure group were decreased significantly compared with Senile Model group（P<0.01）. Co nclusion The comprehensive application of Radix Polygonum Multiflorum Preparata, Radix Glehniae and Radix Salviae Miltiorrhizae has an obvious therapeutic effect on delaying the proceeding of cataract.
【Key words】 Radix Polygonum Multiflorum Preparata; Radix Gl ehniae; Radix Salviae Miltiorrhizae; Lens; Oxidative damage; Rats
近年的研究证实白内障的发生与脂质过氧化物有关，氧自由基诱发的脂质过氧化物是晶状体衰老的病理基础，寻找终止或抑制晶状体脂质过氧化反应的方法将有利于延缓和预防白内障的发生和发展。水溶性荧光物质（water-soluhie fluoresccnt substance，WSFS）是脂质过氧化物的降解产物和蛋白质的结合物，其可作为体内脂质过氧化的指标。我们通过应用荧光光谱法对衰老大鼠晶状体中的WSFS进行对比测定，探讨中药制剂（制何首乌、北沙参、紫丹参）抗氧化损伤的作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药物和试剂 中药制剂由制何首乌、北沙参和紫丹参3味药组成，将上药浸泡后，常规水煎2次，将两煎液混合浓缩成每mL含生药1.5 g的水煎液，分装，密封，冷藏保存。由河北医科大学第三医院制剂室制备。D-半乳糖由上海试剂二厂生产，批号：051075-01。
1.1.2 实验动物 采用2个月龄Wister雄性大鼠30只，体质量149～152 g，由河北医科大学实验动物中心提供,动物合格证号：SCXK（冀）2003-1-003。
1.1.3 实验仪器 采用MPF-4荧光分光光度计。激发光波长350 nm，发射光波长460 nm，扫描速度60 nm/min。
1.2 方法
1.2.1 动物的分组与模型制备 将实验动物随机分为3组，每组10只。正常对照组：正常大鼠；衰老模型组：大鼠每日颈背部皮下注射D-半乳糖100 mg/kg，连续注射40日，形成糖代谢紊乱所致的亚急性衰老模型；中药治疗组：上述造模的同时，每日2次给予制何首乌、北沙参、紫丹参3味药制成的口服液（以下简称中药制剂）灌胃，4 mL/次，持续40日。40日后处死所有实验动物，测定观察指标。
1.2.2 实验方法 各组大鼠于40日后股动脉放血处死，迅速取出晶状体。将取出的晶状体组织去除血液，滤纸拭干，称质量。加双蒸馏水0.1 mL，用玻璃棒将晶体搅碎，加入乙醇-乙醛溶剂（3∶1 V/V）4 mL，即刻用旋涡混合器振摇5 min,3 000 r/min离心5 min,弃上清。重复此步骤2次后，取上清液做荧光强度测定。用硫酸奎宁溶液（0.05 μmol，硫酸配成0.1 μg/mL）的相对荧光强度，100个单位为标准，再测定处理后的晶体相对荧光强度。
1.3 统计学方法 计量资料用均数±标准差（x±s）表示，用SPSS 12.0统计软件进行单因素方差分析，两两比较用SNK法。
2 结果
正常对照组晶状体中WSFS含量（321.17±8.08）单位，衰老模型组（501.11±6.35）单位，中药治疗组（397.65±8.27）单位。衰老模型组与中药治疗组、正常对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01）,而中药治疗组与正常对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。
3 讨论
现代研究认为，晶体蛋白分为水溶性蛋白和非水溶性蛋白,前者是晶体的结构蛋白，与晶体透明和屈光密切相关。当射线通过晶体时，可发生激烈的光化学、光动力学和光敏反应。伴随这些反应过程，则产生大量的活性氧自由基和氢氧自由基。它们具有极强的氧化能力，产生一系列的脂质过氧化物，其中丙二醛（MDA）毒性最强，通过与晶体结构蛋白、脂膜、棱酸等物质的广泛交联聚合，导致晶体混浊的发生。在交联聚合作用下，可形成脂溶性和水溶性两类荧光物质。水溶性荧光物质是水溶性氨基酸结构蛋白和核酸等物质与MDA交聚的聚合物。因此，对水溶性荧光物质的检测，可用于估价组织中脂质过氧化水平，对晶状体氧化损伤研究具有一定意义。
自由基是生物体正常代谢过程中不断产生的损害自身的毒性产物。其中氧自由基可以引发脂类发生过氧化反应，但由于正常机体中存在着天然的自由基清除剂和抗氧化系统，使自由基的产生和清除处于动态平衡，保持机体不受自由基的损害。眼组织中也存在抗氧化防御系统,如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶等。这些抗氧化物质在维持着晶状体的透明，延缓白内障的发生发展。如果SOD含量减少，晶状体内一些小分子可溶性γ蛋白在堆积的超氧化物作用下,其巯基发生氧化,继而引起分子间以二硫键方式聚合［1］，使晶状体蛋白发生混浊。而MDA是脂质过氧化的中间产物，可与晶状体蛋白的氨基及磷脂中某些基因发生相互交联作用,导致晶状体光散作用增加,产生混浊。因此，提高机体抗氧化物质（如SOD、GSH-Px）的含量，降低过氧化产物（如MDA）的水平，可以延缓和预防白内障的发生。经研究表明，注射D-半乳糖后衰老模型组大鼠与正常对照组相比晶状体中SOD、GSH-Px活力明显降低，MDA含量明显升高；中药治疗组大鼠晶状体SOD、GSH-Px活力较衰老模型组明显升高［2］。
我们所用中药北沙参为伞形科植物珊瑚菜（Glehnia littoralis Fr.Schmidt et Miq）的干燥根，具有养阴润肺、益胃生津的功效,主治肺热燥咳、虚劳久咳等证,并常应用在抗衰老和癌症化疗后恢复体质的中药方剂中［3］。现代化学及药理研究表明，北沙参的主要有效成分香豆素类（亦称内酯类）具有明显的抗氧化活性［3］。袁旭等［4］研究滨蒿内酯平喘机制之一，即是它可以通过清除氧自由基来控制炎症的迁移和加重。Kaneko等［5］通过试验证明七叶内酯可保护细胞不受亚麻酸氧化物引起的细胞毒性作用。
紫丹参为唇形科植物云南鼠尾草（Salvia yunnanensis C.H. Wright）的干燥根及根茎，功效为祛瘀生新、活血调经、清心除烦。它的主要有效成分为总丹参酮类及总酚酸类。总丹参酮类可与脂质中碳中心自由基（R·）复合成稳定自由基（AH-R·）,从而抑制或阻止脂质的氧化［6］。
何首乌为蓼科植物何首乌（Polygonum multiflorum Thunb.）的块根，因炮制方法不同，有生何首乌与制何首乌之分。制何首乌是取何首乌干燥块根，按照蒸法，清蒸至内外均呈棕褐色，再切片干燥而成［7］，是乌须发、悦颜色、补肝肾、养精血、抗衰老的良药。其主要成分为蒽醌衍生物、二苯乙烯苷类、磷脂类及Cu、Mn、Na等金属元素。它能保护SOD，有抑制脑中单胺氧化酶的活性，调节免疫系统的功能。有实验结果表明，制何首乌可明显降低老年小鼠血中SOD、CAT、GSH-Px含量，降低脑匀浆、肝匀浆中脂质过氧化物（LPO）水平，从而消除自由基对机体的损伤［8］。
本实验通过测定衰老大鼠应用中药制剂后晶状体中水溶性荧光物质的含量，评估晶状体组织中脂质过氧化水平，发现其含量明显降低。可见，此中药制剂对衰老晶状体具有明显的抗氧化损伤作用。另外，从中医学角度来说，制何首乌、北沙参和紫丹参具有补肾、健脾（胃）、强心之功效。肾为先天之本，脾为后天之本，心为君主之官。本中药制剂寒温并用，益阴升阳，甘苦兼施，可以活血通脉，益脾胃而生津，补肾填精，从而达到祛病、抗衰、明目之目的。
【参考文献】
［1］ 赵伟康，徐品初，金国琴，等.941方对衰老大鼠晶状体浊度、自由基代谢及醛糖还原酶活力的影响［J］.中药药理与临床,1997,13（4）:35-37.
［2］ 赵平,白瑜，张玉玲，等．中药对晶状体氧化损伤的防治作用［J］．时珍国医国药，2007,18（8）:1823-1824.
［3］ 江苏新医学院. 中药大辞典［M］.上海:上海人民出版社,1977:644.
［4］ 袁旭,李智,刘洪瑞,等.滨蒿内酯对哮喘豚鼠气道炎症的抑制及其清除氧自由基作用［J］.中国医科大学学报,2002, 31（6）:404-406.
［5］ Kaneko T, Baba N, Matsuo M. Protection of coumarins against linoleic acid hydroperoxide-induced cytotoxicity［J］. Chem Biol Interact,2003,142（3）:239-254.
［6］ 孙丽芹,董新伟,刘玉鹏,等.脂类的自动氧化机理［J］.中国油脂,1998,23（5）:56-57.
［7］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典:一部［M］.广州：广东科学技术出版社，1995:150.
［8］ 苗明三,方晓艳.制何首乌多糖对衰老模型小鼠抗氧化作用的研究［J］.中药药理与临床,2002,18（5）:23-24. |
