2.5 样品的测定

　　2.5.1 萃取时间的选择 同一批样品精密量取2.5ml至分液漏斗，加入5ml氯仿，振摇并计时。当振摇10min时，取出氯仿层溶液适量，以氯仿为空白，于290nm处测定吸光度;倒回分液漏斗继续振摇，并分别在20min、30min重复操作。结果见表3。

　　表3 振摇时间对萃取的影响（略）

　　结果表明，延长振摇时间并未使萃取量有显著的增加。因此，每次萃取时，振摇10min即可。

　　2.5.2 萃取量选择 同一批样品精密量取2.5ml至分液漏斗，加入5ml氯仿，振摇10min后，将氯仿层全部分离出来，以氯仿为空白，在290nm处测定吸光度。重复上述操作5次，累计加入25ml氯仿。结果见表4。

　　表4 不同提取次数对测定的影响（略）

　　将所测A值带入标准曲线方程，所得浓度即为第n次萃取后，萃取液氯仿中的相当于靛玉红的浓度。将浓度累计，即得n次萃取后，氯仿中相当于靛玉红的浓度，也就是样品相当于靛玉红的浓度。计算结果见表5。

　　表5 不同提取容积对测定的影响（略）

　　从试验结果和计算结果表明，第四、五次萃取后浓度已无明显变化，因此，萃取2.5ml样品，用20ml氯仿即可。

　　2.5.3 萃取次数的选择 精密量取2.5ml样品3份，分别20ml氯仿以不同次数对其进行萃取:第一组20ml萃取1 次;第二组先后以10ml萃取2次;第三组先以5ml、5ml，10ml萃取3次;第四组分别以5ml萃取4次。分别测定吸光度并计算浓度，操作步骤与计算方法同上。结果见表6。

　　表6 不同萃取次数对测定的影响（略）

　　由于萃取3次与萃取4次浓度变化不大，且4次萃取时的4次溶液开始乳化，因此，只需将20ml氯仿分3次萃取即可。

　　2.5.4 重现性实验 同一组样品测定5次，操作同上。结果见表7。

　　表7 重现性实验结果（略）

　　从结果可知，该萃取方法重现性较好，操作简便易行。

　　2.5.5 含量测定 方法:精密吸取板蓝根滴眼液2.5ml于分液漏斗中，再精密吸取5ml氯仿加入其中，振摇10min，分离氯仿层，以氯仿为空白，再290nm处测定吸光度;再依次精密吸取5ml、10ml氯仿萃取2次，操作同上。将吸光度值带入标准曲线方程进行计算，方法同上。

　　测定五批样品，计算结果见表8。

　　表8 不同批号的含量测定结果（略）

　　该含量测定方法重现性较好，且操作简单易行;通过对五批样品的测定，可确定该板蓝根滴眼液的含量相当于靛玉红浓度的0.720～0.750μg/ml。

　　3 讨论

　　本文通过对板蓝根提取液的紫外扫描，确认了板蓝根的有效成分为靛玉红，并建立了以靛玉红为质量标准的紫外分光光度法作为板蓝根滴眼液的含量测定方法。通过回收率试验以及日内差、日间差试验，证明该方法灵敏度高，专属性强，重现性好，且简便易行。

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