武征   周杨   李乃洋   黄明海   段豪云   葛坚   项鹏   王智崇

中山大学中山眼科中心   中山大学干细胞与组织工程研究中心   510060

目的：探索使用磷脂酶A2(PLA2)制备的脱细胞猪角膜基质（APCS）作为组织工程角膜支架材料的可行性。

方法：在包含1.8mM Ca2+的碳酸盐缓冲液（pH 8.3），中，使用200U/ml PLA2和0.5%的脱氧胆酸钠(SD)对正常猪角膜（NPC）进行脱细胞处理制备APCS，并对该方法的脱细胞效率，APCS中胶原和蛋白多糖的成分和结构变化、脱细胞试剂残留量、生物相容性、免疫原性、光学透明性、生物力学性质进行了综合评价。

结果：该脱细胞方法去除了NPC中91%的DNA成分，对羟脯氨酸成分没有造成明显影响，并且保留了82%的氨基葡聚糖成分，APCS中胶原纤维的直径和间距与NPC无显著性差异。APCS中PLA2和SD的残留量分别为0.35±0.04 U/mg和 4.3±0.8 ng/mg，其浸提液不影响兔角膜上皮细胞、基质细胞和内皮细胞的增殖；APCS皮下移植2周后无淋巴细胞和中性粒细胞浸润现象；300~800 nm范围内，APCS显示了与NPC相似的体外透光率；在10~60 mmHg压强范围内，APCS的面膜量和曲率变化与NPC比较无显著性差异；利用该APCS行兔板层角膜移植术后，APCS植片可在8±2天完全上皮化；84±11天恢复高度透明，透光率与正常角膜无差异。角膜上皮愈合和基质愈合良好，12个月内未观察到角膜新生血管，角膜形变和植片降解现象。

结论：使用PLA2脱细胞方法制备的APCS具有良好的生物相容性，极低的免疫原性、高度的透明性，保持了足够的生物力学强度和长期的生物稳定性，有望成为构建组织工程角膜的良好支架材料。