李晓霞   陈建苏

暨南大学医学院眼科研究室   暨南大学第一临床医学院   暨南大学教育部再生医学重点实验室   510630

目的：研究兔角膜基质细胞生长特性为组织工程角膜的构建奠定基础，探讨在旋转培养系统中兔角膜基质细胞在复合材料上的三维生长特性，为构建组织工程角膜提供新的途径。

方法：Ⅱ型胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞，以密度为1×105/mL将第4-5代细胞种植于无菌复合载体材料上。以旋转培养系统中培养兔角膜基质细胞为实验组与传统静态培养系统进行细胞培养作对照。分别在6、12、18d取细胞和载体行苏木精-伊红染色光镜观察、扫描电镜和共聚焦显微镜观察；在3、6、9、12、15、18 d取出行CCK-8法检测细胞增生功能。

结果：兔角膜基质细胞对照组只在材料表面可见单层细胞且与载体连接不紧密；实验组大量细胞与载体黏附紧密且生长入载体内部，载体材料降解显著。扫描电镜下实验组可见细胞胞体小且突触丰富，培养第18d细胞在材料表面分泌大量胶原膜样物，CCK-8示旋转系统中细胞增殖旺盛；共聚焦显微镜清楚可见在旋转培养系统中角膜基质细胞在材料内部呈小球形团块中生长。

结论：旋转培养系统促进细胞增殖，且在符合载体材料上培养的兔角膜基质细胞更接近生理状态，更适用于组织工程三维构建，为构建更接近生理状态的组织工程角膜提供了依据。