许瀛海 扬蓓蓓 颜华

　　天津医科大学总医院 300052

　　目的：建立大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells.MSCs)体外分离、培养及鉴定方法，为进一步研究骨髓MSCs的诱导分化及其在组织工程中的应用奠定基础。

　　方法：颈椎脱臼处死wistar大鼠，提取其股骨、胫骨和肱骨骨髓，采用贴壁培养法分离、培养骨髓MSCs，经多次换液、传代以实现细胞纯化。通过绘制MSCs的生长曲线，计算倍增时间，测定细胞贴壁率，分析MSCs的生物学特性和细胞活力，观察MSCs的形态、传代及增殖状态。并通过免疫荧光细胞化学染色法及流式细胞仪技术对MSCs进行表型鉴定。通过体外诱导向脂肪细胞分化对MSCs进行功能鉴定。

　　结果：分离培养大鼠骨髓MSCs，细胞贴壁生长，呈梭形，增殖能力强，原代细胞呈旋涡状或放射状集落生长，10-14天可达融合。传代后增殖速度加快，平均倍增时间为48h，随传代次数的增加细胞的增殖能力有所下降。第1、3、5代细胞接种12h后贴壁率在90%以上。骨髓MSCs均一的表达CD44、CD90，不表达CD34。第3 代MSCs成脂诱导剂定向诱导2周，经油红O染色鉴定，细胞向脂肪细胞分化。

　　结论：应用贴壁培养法，可以有效分离、纯化培养大鼠骨髓MSCs。细胞表面标志CD34阴性、CD44阳性，CD90阳性可作为鉴定骨髓MSCs的一种方法。