王楷迪 孙兴怀

　　复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 200031

　　目的：对GFP转基因小鼠视网膜前体细胞(RPCs)进行体外分离、培养和鉴定，为利用其示踪研究分化机制奠定基础。

　　方法：分离出生第1天的GFP转基因小鼠的RPCs，无血清DMEM/F12培养基悬浮培养并在体外诱导分化，倒置相差显微镜观察细胞的生长和分化情况，免疫细胞化学方法检测Nestin、MAP2、GFAP、Thy1.1、PKCa、Opsin的表达。

　　结果：RPCs在DMEM/F12无血清培养基中能保持增殖未分化状态，形成神经球样结构，贴壁后，细胞逐渐从细胞球向周围迁移分化，分化后细胞形态多样。连续传代后，细胞球和分化后细胞的GFP表达不受影响。免疫细胞化学显示悬浮培养的细胞球中大部分细胞表达神经外胚层源性干细胞标志Nestin和细胞分裂增殖标志BrdU，贴壁后，RPCs能分化为多种视网膜细胞类型，包括Thy1.1阳性的RGCs。

　　结论：体外培养的RPCs具有无限增殖和多向分化潜能，且稳定表达GFP。