曾琦 夏晓波 戴敏

　　中南大学眼科研究所 中南大学湘雅医院眼科 410008

　　目的：构建 PEGFP-N1-Math5重组质粒，确定PEGFP-N1-Math5对体外培养的鼠视网膜Müller细胞定向分化为视网膜神经节细胞的调控作用。

　　方法：体外培养鼠视网膜Müller细胞，取第3-4代细胞改由1×N2 supplement、EGF、FGF-2的DMEM/F12条件培养基培养，诱导Müller细胞去分化为视网膜干细胞，采用免疫荧光染色鉴定细胞。构建PEGFP-N1-Math5重组质粒，酶切鉴定并测序。选用电穿孔法将PEGFP-N1-Math5重组质粒转染入Müller细胞去分化而来的视网膜干细胞，随后改由含BDNF、RA和FBS的DMEM条件培养基诱导干细胞进一步分化，选用神经节细胞特异性抗体Thy1.1行免疫荧光染色，并计数神经节细胞占分化而来的总细胞数的比例。

　　结果：条件培养基培养视网膜Müller细胞2-5天后，细胞变圆并且聚集形成神经球，行免疫荧光和RT-PCR鉴定，证实为视网膜干细胞。将未转染和转染Math5及空载体的三组视网膜干细胞进行进一步分化培养，5-7天后可见神经球贴壁且分化出大量细胞，行免疫荧光染色鉴定，部分为视网膜节细胞。随机选取10个视野计数细胞，发现Math5转染组较其他两组分化所得神经节细胞占总细胞数的比例更高，且差异具有统计学意义。

　　结论：Math5可调控视网膜Müller细胞定向分化为视网膜神经节细胞。这可能为青光眼视网膜神经节细胞再生提供新的来源，从而为青光眼的临床治疗提供一条崭新的基因治疗和视神经再生途径。