李颖 罗莉莎 杜兆东 马志中

　　北京大学第三医院眼科中心 100191

　　目的：探讨一种理想的体外分离培养SD大鼠视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium，RPE)的方法，为研究RPE细胞功能及眼底疾病的治疗奠定基础。

　　方法：选用200-250g的SD大鼠，深度麻醉下摘取眼球，解剖显微镜下去除前节，采用双重酶消化法获取RPE 细胞。首先加入1%透明质酸酶37℃消化3分钟，之后，0.25%Trypsin/EDTA及透明质酸酶混合液继续消化30分钟，含血清培养液终止消化，收集细胞悬液，离心获取细胞。计数后接种培养皿中，加入含10%胎牛血清的DMEM-F112培养液中培养。MTT法检测生长曲线观察细胞生存活力，并用CK3、CRALBP及RPE65进行细胞形态学、免疫组织化学鉴别及鉴定细胞，以及应用电镜观察超微结构。

　　结果：体外培养获得了高纯度、高产量的SD大鼠RPE细胞，并且细胞生长状态良好。原代培养细胞立体多角形，传代细胞呈梭形，透射电镜显示RPE细胞存在微绒毛、紧密连接及完好的细胞器。检测视网膜RPE细胞相关蛋白CK3、CRALBP及RPE65均特异性阳性表达。

　　结论：双重酶消化法是分离培养SD大鼠RPE细胞的理想方法，培养的RPE细胞可用于基础和临床眼底疾病的研究。