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3讨论
Tβ4最初被认为是一种G肌动蛋白偶联蛋白，能与G肌动蛋白单体结合阻断F肌动蛋白形成，调节细胞肌动蛋白骨架的动态变化，与细胞运动等功能密切相关[13]。早在1999年Yong等[11]发现Tβ4硫氧化物(thymosin sulfoxide)在体内体外均有很好的抗炎作用，能抑制中性粒细胞的趋化作用，减少炎症介质释放等。Badamchian等发现Tβ4能降低大剂量内毒素对大鼠的致死率，减少血液中IL1, PFG等多种炎症因子的含量，提示Tβ4具有抗内毒素休克作用[14]。Sosne等用不同的动物模型证实Tβ4具有抗炎促进角膜损伤修复的作用。我们的实验结果证实Tβ4可加速角膜碱烧伤后愈合，组织学观察显示角膜再上皮化明显，角膜各层组织结构清晰，减少角膜内炎症细胞浸润。
角膜碱烧伤后启动一系列的炎症进程，释放大量的趋化因子诱导中性粒细胞、巨噬细胞等进入损伤区域，并且许多前炎性因子如TNFα, IL1β等释放增加，使损伤局部炎症失调，这是角膜碱烧伤后组织破坏严重难以愈合的原因之一。Sosne等研究Tβ4可以降低角膜碱烧伤后MIP和MCP, KC等趋化因子表达，减少PMN浸润，减轻修复过程中过度的炎症反应，促进角膜愈合[3]。TNFα和IL1β等前炎症因子能激活多种信号通路而在调节组织炎症过程中起关键作用[2]。NFκB是TNFα和IL1β等激活的重要的转录因子，调节许多炎症相关细胞因子的转录表达。早期研究使用NFκB特异性抑制剂能减轻组织炎症损伤，促进角膜碱烧伤愈合[12]。Sosne等[6]研究Tβ4在体外对角膜碱烧伤后NFκB的作用，发现NFκB的活性被降低，细胞核内p65蛋白的表达量降低，可能Tβ4是通过抑制NFκB来调节角膜炎症反应的程度。我们利用免疫组织化学染色观察角膜碱烧伤后NFκB的表达，发现NFκB在上皮基底层表达最多，基质层只在巨噬细胞和中性粒细胞周围有表达，内皮全层阳性，统计平均光密度发现在7d和14d在Tβ4低剂量组(P<0.01)和中剂量组(P<0.05)比对照组低。因为NFκB激活后必须转位到细胞核内才能发挥其转录活性，我们抽提了角膜组织细胞核蛋白，利用ELISA定量分析p65亚基的表达，发现在3,7和14d时细胞核内的NFκB p65亚基表达比阴性对照和阳性对照组低(P<0.01)，说明Tβ4抑制细胞核内有效NFκB的表达量。与免疫组化染色结果比较，发现NFκB表达降低的时间点提前(免疫组化在7d才发现降低)，可能因为免疫组化显示全细胞内NFκB的表达，而ELISA结果仅显示细胞核内NFκB的表达。以上结果显示Tβ4可抑制NFκB表达并阻止其向细胞内转移，为了显示这种抑制作用是否发生在激活NFκB的上游通路，我们用免疫组化检测一种重要前炎症因子IL1β的变化，发现在各个时间点Tβ4用药组与对照组无差异(P>0.05)。提示Tβ4可能对前炎症因子表达无调节作用，对NFκB的抑制作用是在NFκB的激活和核转位的过程中。现已证明，Tβ4可通过多种途径促进损伤组织修复，随着相关作用机制不断被揭示和阐明，它有望成为促进角膜创伤愈合，尤其是糖尿病视网膜病变、角膜溃疡和角膜手术后创伤愈合的新的治疗药物。
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