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2结果
2.1视网膜神经细胞凋亡
正常对照组视网膜未见明显神经细胞凋亡;糖尿病组4wk可见散在的凋亡细胞分布于内核层，大部分神经节细胞层未见明显凋亡，仅偶见零散凋亡细胞，外核层细胞未见明显凋亡细胞，细胞核呈深蓝色(图1A);糖尿病组8wk可见内核层凋亡细胞增多、密度增大，神经节细胞层也出现明显染色阳性的凋亡细胞(图1B);糖尿病组12wk视网膜神经节细胞层及内核层可见凋亡细胞明显增多(图1C)。糖尿病组大鼠于建模后4wk即出现视网膜神经细胞凋亡，8和12wk大鼠视网膜神经凋亡程度较同期正常对照组大鼠均明显增强。神经细胞凋亡主要位于视网膜神经节细胞层及内核层。
2.2视网膜caspase3表达
对照组大鼠4，8，12wk视网膜未见caspase3阳性表达;糖尿病组4wk视网膜内核层及神经节细胞层均可见caspse3表达(图2A);8wk及12wk caspase3表达逐渐增强(图2B，C)。正常对照组大鼠随鼠龄增长视网膜caspase3 mRNA表达量均无明显变化，其差异无统计学意义(4,8,12wk为1.6±0.6，1.5±0.5，1.6±0.3，P>0.05)。糖尿病组随着糖尿病病程的延长，视网膜caspase3 mRNA表达量(RQ值)呈逐渐增强趋势，在4wk(5.7±1.2)与同期对照组相比即出现明显差异(P<0.01)，至8wk(12.6±2.3)及12wk(14.3±2.1)差异更为显著。
3讨论
DR包括视网膜微血管病变及神经病变，在糖尿病患者[4,5]和动物实验[6]中，都证实在未出现视网膜微血管病理改变之前，已存在视网膜神经组织的损伤及功能改变，并认为，DR不仅仅是微血管病变，它还是一种神经变性疾病，其病理生理改变可能与微血管病变相关[79]，甚至是微血管病变的启动因素[10]。视网膜神经细胞凋亡是DR早期最主要的病理表现形式。TUNEL法是近年来出现的将分子生物学与形态学相结合的细胞凋亡原位检测技术，主要用于早期凋亡的检测，其敏感性高、特异性强，而且能够定量的表现细胞凋亡的程度，因而是目前广泛应用的细胞凋亡检测方法。我们发现，正常对照组大鼠视网膜未见神经细胞凋亡，而糖尿病组大鼠发病4wk时视网膜内核层可见散在的标记阳性的凋亡细胞，此时神经节细胞凋亡不甚明显，随着病程的延长，视网膜神经节细胞层及内核层的凋亡细胞逐渐增多，表明：糖尿病早期首先出现视网膜内层神经细胞凋亡，凋亡程度可能与糖尿病病程有关。视网膜神经节细胞是视觉信息传递的第三级神经元，其数量和功能的改变与视功能状态关系密切，视网膜神经节细胞及内核层细胞的凋亡最终可能导致视功能的下降。在细胞凋亡途径中，caspase3占有至关重要的地位，它是细胞凋亡途径下游的关键执行分子，因此在细胞凋亡中capase3的表达变化具有重要意义。本结果显示糖尿病组大鼠4wk时capase3免疫组织化学染色即出现阳性表达，主要位于视网膜内核层及神经节细胞层，8wk及12wk时表达逐渐增强，这与TUNEL法检测糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的发生位置、及随病程延长逐渐加重的发展变化趋势相一致。实验还发现在糖尿病4wk时，在神经节细胞层TUNEL法未出现明显染色阳性的细胞时，capase3已出现较为明显的阳性表达，提示capase3的激活早于TUNEL法检测到的细胞凋亡，从而也对caspase3是细胞凋亡执行分子的观点加以解释。Caspase3与细胞凋亡关系密切，目前已作为一项细胞凋亡的检测指标广泛应用于各种研究之中。除了应用免疫组化方法对caspase3定性及定位的检测外，我们还对caspase3的基因表达进行了定量分析以评估其随糖尿病病程发展变化的严重程度，发现糖尿病4wk时视网膜caspase3的基因表达较正常大鼠相比明显增强，至8wk及12wk时更为显著，说明随糖尿病病程延长，caspase3的基因表达逐渐增强，并与细胞凋亡的严重程度呈正相关，因而可以推测糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞的凋亡与caspase3的表达增强有关，抑制其表达可能通过减轻视网膜神经细胞凋亡而达到神经保护的目的。
【参考文献】
1李维业，徐国彤.凋亡是糖尿病视网膜微血管病变和神经元病变的细胞病理学基础.国际眼科纵览 2008; 32(2):7377
2 Park JW, Park SJ, Park SH, et al. Upregulated expression of neuronal nitric oxide synthase in experimental diabetic retina. Neurobiol
Dis 2006;21:4349
3 Limaye PV, Raghuram N, Sivakami S. Oxidative stress and gene expression of antioxidant enzymes in the renal cortex of streptozotocininduced diabetic rats. Mol Cell Biochem 2003;243(12):147152
4 Han Y, Adams AJ, Bearse MA Jr, et al. Multifocal electroretinogram and shortwavelength automated perimetry measures in diabetic eyes with little or no retinopathy. Arch Ophthalmol 2004;122(12):18091815
5 Neckell A. Adaptometry in diabetic patients. Oftalmologia 2007;51:9597
6 Hancock HA, Kraft TW. Oscillatory potential analysis and ERGs of normal and diabetic rats. Invest Ophthalmol Vis Sci 2004;45(3):10021008
7 Barber AJ. A new view of diabetic retinopathy: a neurodegenerative disease of the eye. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry 2003;27(2):283290
8 FeitLeichman RA, Kinouchi R, Takeda M, et al. Vascular damage in a mouse model of diabetic retinopathy: relation to neuronal and glial changes. Invest Ophthalmol Vis Sci 2005;46(11):42814287
9 Serrarbassa PD, Dias AF, Vieira MF. New concepts on diabetic retinopathy: neural versus vascular damage. Arq Bras Oftalmol 2008;71(3):459463
10 Fletcher EL, Phipps JA, Ward MM , et al. Neuronal and glial cell abnormality as predictors of progression of diabetic retinopathy. Curr Pharm
Des 2007;13(26):26992712 上一页 [1] [2] |
