摘要 目的观察天然药物血竭素高氯酸盐(Dp)对离体兔角膜基质细胞增生的抑制作用,探讨其对细胞凋亡的影 响,为临床上角膜瘢痕的防治提供新思路。方法新西兰白兔18只,采用组织块培养法,在含10% 胎牛血清的DMEM/F12培养液中培养兔角膜基质细胞,通过含有EDTA的胰蛋白酶消化进行传代。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同质量浓度Dp(10~80 Ixg/mL)对细胞生长的抑制率,电镜观察Dp作用后角膜细胞的凋亡情况,流式细胞术(FCM)检测Dp作用后细胞凋亡率。结果第3代角膜基质细胞呈现对波形蛋白单克隆抗体阳性反应和对角蛋白12多克隆抗体的阴性反应。角膜上皮细胞对角蛋白l2抗体呈现绿色的荧光反应。Dp作用24、48、72 h后,其Ic 。分别为47.721、41.40、32.01 g/mL。MTT比色法显示Dp对角膜基质细胞的抑制率呈现明显的质量浓度依赖性;电镜可观察到角膜细胞的凋亡;FCM检测Dp作用24 h的细胞凋亡率呈剂量依赖性升高(P<0.01)。在Dp作用后24、48、72 h,Dp质量浓度与抑制率呈正相关(r=0.984,P<0.01;r=0.947,P:0.007;r:0.920,P:0.03)。结论Dp对兔角膜基质细胞的增生具有显著的抑制作用,且呈量效关系促进角膜基质细胞发生凋亡。
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