【摘要】 目的：分析结膜松弛症泪液中肿瘤坏死因子α( TNFα)、白细胞介素6 (IL6 )和白细胞介素8 (IL8 )的表达量的变化。方法：收集25例结膜松弛症患者和13例正常对照组的泪液样本，毛细管从每眼收集15μL泪液，采用放射免疫测定法测定结膜松弛症组和正常对照组的泪液中TNFα，IL6和IL8的浓度并进行统计学分析。结果：结膜松弛症患者TNFα浓度为19.05±6.35ng/mL，正常对照组TNFα浓度为14.13±7.76ng/mL;IL6浓度为13.16±8.97pg/mL，正常对照组IL6浓度为4.24±3.97pg/mL;IL8浓度为34.40±20.73pg/mL，正常对照组IL8浓度为18.31±11.62pg/mL;两组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：应用放射免疫的方法可检测泪液中的细胞因子含量，结膜松弛症组泪液中三种细胞因子的含量显著增高提示结膜松弛症可能与细胞因子的增加及免疫反应有关。
【关键词】 结膜松弛症;肿瘤坏死因子α;白细胞介素6;白细胞介素8;放射免疫测定法;泪液
Tears cytokines in conjunctivochalasis
MinHong Xiang1, XingRu Zhang1, XunYi Zhang2, FengJun Zhuang1, Ling Li1, QingSong Li1, JiangFan Shen2
Foundation item:Traditional Chinese Medicine Research Foundation Project of Health Bureau,Shanghai,China(No.2008Q006)
1Department of Ophthalmology;2Department of Nuclear Medicine,Putuo Hospital,Traditional Chinese Medical University,Shanghai 200062,China
Correspondence to:MinHong Xiang.Department of Ophthalmology, Putuo Hospital,Traditional Chinese Medical University,Shanghai 200062,[email protected]
Received:20100510 Accepted:20100809
Abstract
AIM: To analyze the expression changes of tumor necrosis factor α (TNFα), interleukin6 (IL6) and interleukin8 (IL8) in conjunctivochalasis tears.
METHODS: Tears samples were obtained from 25 conjunctivochalasis cases and 13 normal controls. Fifteen microliters of tears were collected by microcapillary tubes from each eye. The tear concentrations of TNFα, IL6 and IL8 were analyzed by radioimmunoassay method and compared the statistical difference between conjunctivochalasis and normal controls.
RESULTS: The concentration of TNFα in conjunctiv ochalasispatients was 19.05±6.35ng/mL, in normal control group was 14.13±7.76ng/mL; conjunctivochalasis concentration of IL6 was 13.16±8.97pg/mL, normal control group concentration of IL6 was 4.24±3.97pg/mL; conjunctivochalasis concentration of IL8 was 34.40±20.73pg/mL,normal control group concentration of IL8 was 18.31±11.62pg/mL. The difference between the two groups was significant (P<0.05).
CONCLUSION: Radioimmunoassay method could detect levels of cytokines in tears. The tear concentrations of the three cytokines from the conjunctivochalasis group were significantly higher, which may indicate conjunctivochalasis is related to the increase of cytokines and immune response.
KEYWORDS: conjunctivochalasis;tumor necrosis factor α;interleukin6;interleukin8; radioimmunoassay;tear
Xiang MH, Zhang XR, Zhang XY, et al. Tears cytokines in conjunctivochalasis. Int J Ophthalmol (Guoji Yanke Zazhi) 2010;10(9):17021703
结膜松弛症(conjunctivochalasis,CCh)是年龄相关性老年人常见眼病，随着人口老龄化加快，患者日趋增多。患者主诉眼部干涩、异物感、泪溢，严重病例伴有刺痛、灼痛感、角膜溃疡或结膜下出血等，影响眼视觉和生活质量[1,2]。前期研究发现结膜松弛症泪液中羊齿状结晶减少，泪液中黏蛋白异常。同时伴有结膜杯状细胞数量的减少,从而导致泪液分泌异常、泪膜稳定性下降、泪液排泄延缓[3,4]。但是,结膜松弛症泪液的成分改变特别是泪液中细胞因子的变化趋势目前还未见相关报道。我们采用放射免疫测定法检测已明确诊断的结膜松弛症患者和正常人的泪液样本，比较两组差异。对结膜松弛症患者泪液中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)、白细胞介素6 (interleukin6, IL6)和白细胞介素8 (interleukin8, IL8)的表达量进行测定,旨在进一步了解结膜松弛症泪液中细胞因子的特异性改变，从而探索结膜松弛症的发病机制。
1对象和方法
1.1对象
结膜松弛症组病例选择[1]:按结膜松弛症诊断标准入选病例[5];排除角膜、泪腺及泪点异常，冲洗泪道不通畅，有睑缘内、外翻及倒睫的病例;无影响泪液学异常的其他眼病及全身性疾病，也无眼部手术史，3mo内未应用影响泪液的药物。正常对照组选择[1]:患者无眼部不适主诉。裂隙灯检查眼表形态结构无异常。3mo内未应用影响泪液的药物。随机年龄配对对照。收集200901/200906病例资料，其中结膜松弛症组25例25眼，男10例，女15例，年龄65～81(平均70.95)岁。按张兴儒诊断分级标准[5]：I级3眼，II级9眼，III级10眼，IV级3眼。正常对照组13例13眼，男6例，女7例，年龄68～85(平均71.64)岁。TNFα，IL6，IL8放射免疫试剂盒(美国西门子公司)。IMMULITE1000化学发光仪(美国西门子公司)，自吸式毛细管(国药集团化学试剂有限公司)。
1.2方法
人泪液标本均根据自愿的原则，通过10μL的玻璃毛细管在下睑结膜囊泪阜处虹吸采集泪液(未使用表面麻醉药物或其他化学性药物)，尽量不接触眼表，每个病例收集15μL泪液，Ep管分装，置80℃冷冻冰箱保存。采用平衡法标记聚苯乙烯试管，分别为总数(T)、非特异结合(NSB)、最大结合(SO)和样本(U)。加样。室温放置20min后，离心。设置γ计数仪各参数后，按放射免疫测定法程序要求将各测定管放入测定架上，按次序进行测定。测量结束，处理数据，打印出待测样品结果进行分析。
统计学分析：使用SPSS 12.0统计学软件进行统计处理，采用两样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
结膜松弛症患者TNFα浓度为19.05±6.35ng/mL;正常对照组TNFα浓度为14.13±7.76ng/mL，两组之间比较差异有统计学意义(t=2.054,P<0.048)。结膜松弛症患者IL6浓度为13.16±8.97pg/mL;正常对照组IL6浓度为4.24±3.97pg/mL，两组之间比较差异有统计学意义(t=3.398,P<0.002)。结膜松弛症患者IL8浓度为34.40±20.73pg/mL;正常对照组IL8浓度为18.31±11.62pg/mL，两组之间比较差异有统计学意义(t=2.194, P<0.036)。
3讨论
结膜松弛症是年龄相关性老年性常见眼病。Mimura 等[2]查东京医科大学医院就诊的1416例1～94岁人群，结膜松弛症患病率为85.24%。李青松调查上海市曹杨新村街道≥60岁2110例4220眼中有930例1762眼患有结膜松弛症，患病率为44.08%，其患病率随着年龄增大而增高，呈现年龄相关性眼病[1]。
泪液是一种复杂的生物复合体，其有形成分中90%以上为蛋白质，包括酶类和细胞因子，其在眼表免疫防疫系统中起着重要的作用[6]。Stern等[7]认为尽管干眼症的病因多种多样，但最终眼表的损害都是经过细胞因子受体介导的炎症过程。细胞因子多数细胞活化后，可产生多种多样的参与炎症、免疫、细胞生长、凋亡、分化和创伤修复的低分子量蛋白，这些蛋白被称为细胞因子，皮克(pg)或那克(ng)量的细胞因子就可发挥相应的活性。
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