2  OPTN基因的克隆及表达

    OPTN基因曾被作为FIP2、TFIIIA-INTP和NRP基因进行研究。

    C组人类腺病毒Ad的E3区（Early region 3）编码多种肿瘤坏死因子alpha（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）抑制子［5］，特别是一种E3 14.7-kDa蛋白(E3-14.7 K)。为阐明该蛋白抑制TNF-α诱导凋亡的机制，Yongan Li［6］等在酵母双杂交系统用E3-14.7 K筛选海拉细胞cDNA文库时发现了一种包含多个亮氨酸拉链结构的新的蛋白，命名为14.7 K相干蛋白（14.7 Kinteracting protein，FIP-2）。

    2000年，Moreland RJ等［7］学者克隆出了同样的基因。已经知道真核细胞中转录因子IIIA (TFIIIA)能激活5S核糖体RNA基因的转录［8］。有脊椎动物的TFIIIA蛋白结构包含9个半胱氨酸-组氨酸锌指结构，其主要功能为核酸的黏附［9，10］，而TFIIIA的羧基末端参与转录活动。为查明参与TFIIIA作用过程的成分，笔者使用TFIIIA蛋白羧基末端为诱饵，通过酵母双杂交系统，在小鼠的cDNA文库中，诱导出与其相互作用的成分，并将其命名为转录因子IIIA相干蛋白（TFIIIAinteracting protein，TFIIIAintP），并且为了验证该蛋白是不是所要寻找的目标，笔者还用TFIIIAintP抗体与TFIIIAintP相互反应，通过免疫沉淀试验验证。结果他们发现了一种分子量为70.6 kD新的蛋白，全长617氨基酸，结构中包括大量亮氨酸拉链结构和亮氨酸富集区。在该蛋白羧基末端553-582氨基酸处，有一个半胱氨酸-组氨酸锌指结构。研究还发现小鼠的TF3AintP与人类具有85％的同源性，特别是一个长度为36个氨基酸，一级结构完全相同的亮氨酸富集区。

    同年，Schwamborn K等［11］发现了一种与NEMO蛋白（NF-κB Essential Modulator,NEMO）高度同源的蛋白，命名为NRP (NEMOrelated protein)。NEMO蛋白在诸如细胞免疫、炎症、细胞凋亡等生理过程中扮演重要角色［12,13］。他们发现这种分子量为67-kD的蛋白，53％与NEMO同源。试验还证实NRP的表达会被干扰素和TNF-α诱导。并在这两种因素的刺激下，NRP的表达将呈明显上调反应。另外，他们还意识到NEMO蛋白可能和高尔基器有关。笔者发现NRP的羧基末端的锌指结构能替代NEMO蛋白的功能。

    OPTN基因的表达已经被研究过。Yongan Li［6］发现FIP2基因表达在人类的心脏、肝脏、肾脏、骨骼肌以及胎盘的脏器中。最近的研究［4］发现OPTN基因还在人类的小梁网、非色素睫状上皮细胞、视网膜以及肾上腺皮质、胎儿、淋巴细胞、纤维细胞中表达。Northern杂交试验检测到两种mRNA的表达，大部分是2.0-kb的成分，丰度高于分子量为3.6-kb的3~4倍。同时Rezeiz等用免疫组化方法再次证实，OPTN蛋白富集于高尔基器，认为OPTN蛋白是一种分泌蛋白。OPTN基因结构，见图1。

   OPTN基因共有16个外显子组成。含13个编码外显子和3个位于5’端的非翻译外显子。开放阅读框共有2077 bp，编码577个氨基酸。OPTN基因的5’端共有3种不同的同族异构结合区，Genebank序列号分别为AF420371，AF420372，AF420373但是它们都有相同的开放阅读框。已经证实，老鼠的OPTN基因与人类的78％同源，编码584个氨基酸。OPTN基因结构中有3个已知的重要的功能域，即：位于4、5外显子的基本亮氨酸拉链转录因子［14］(basic leucine zipper transcription factor,bzip)，10、11外显子的亮氨酸拉链结构［15］（leucine zipper,LZ）和位于OPTN蛋白羧基末端的锌指功能域(ZF-C2H2)［16］。研究证实［17～19，20］，这些特殊的功能域与核酸的黏附有很大关联。

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