2结果

    2.1细胞形态学观察 组织法培养4d可见到细胞从组织块边缘爬出，形态呈梭形，之后细胞渐增殖，大约20d细胞长满约70%～80%即可传代。消化法培养法1d后可见细胞贴壁变形，渐成梭形或多角形，d2换液，去掉未贴壁的细胞。之后细胞增殖较快，10d左右细胞生长接近单层融合，即可传代。传代后细胞呈梭形或多角形，增殖速度加快，5～7d传代1次。随着代次的增加，细胞增殖能力减弱，传代时间延长。

    2.2细胞生长曲线 两种培养方法的前脂肪细胞增殖速度差异无显著性意义（P >0.05），均于d5左右进入指数增长期，9d左右到达平台期。其倍增时间约为60h左右。

        2.3细胞表面抗原的表达 采用流式细胞术分别检测两种方法培养的前脂肪细胞，其间充质干细胞表面标志CD29，CD44均表达阳性，组织块法培养的前脂肪细胞表达CD29，CD44阳性率分别为97.6%，90.6%，酶消化法培养的前脂肪细胞表达CD29，CD44阳性率分别为99.2%，98.2%，阳性率均大于90%。

    2.4分化过程中细胞形态的变化 两种培养方法的前脂肪细胞在加入无血清诱导培养基后，细胞回缩，细胞间隙增大，增殖逐渐停止，形态均由梭形或多角形逐渐变为椭圆形或圆形，体积逐渐变大。d3起胞内出现脂肪颗粒，并逐渐增多，光镜下呈透亮的脂肪小滴，部分可融合变大,诱导完成后，油红O染色呈大小不等的红色脂肪滴，证实所培养的细胞能分化为成熟的脂肪细胞。未传代的原代前脂肪细胞或传代后的前脂肪细胞若不更换诱导培养基，胞质内仅出现较小的脂滴，未见有透亮的、融合的脂肪颗粒。

  分化过程中细胞形态的变化 A：诱导后的成熟脂肪细胞（×250）；B：诱导后成熟脂肪细胞油红O染色（×250）；C：前脂肪细胞的自分化（×100）；D：前脂肪细胞的油红O染色（×100）

    2.5细胞内脂肪含量的变化 分化过程中两种培养方法的前脂肪细胞内脂肪含量增加速度差异无显著性意义(P > 0.05),均于培养d7开始迅速增加,11d左右达到高峰。

    3讨论

    人体脂肪组织中的前脂肪细胞在各种转录因子调控作用下，能增殖、分化为成熟脂肪细胞。在前脂肪细胞与成熟脂肪细胞之间存在着相互作用，调节脂肪细胞分化。眶内前脂肪细胞增殖、分化、凋亡失控可能是导致TAO患者眶内容物增加，眼球突出发生的重要致病环节。近来的研究表明，人体的前脂肪细胞有可能参与炎症反应[1]，从而可能成为参与TAO眶内炎症反应及其发病机制的靶细胞[2]。同时,在组织工程学领域,组织工程化人工脂肪构建的研究还处于探讨、摸索阶段。曾有研究者报道应用大鼠附睾部前脂肪细胞作为种子细胞吸附于PLGA于大鼠侧腹部构建成熟脂肪细胞[3,4]。前脂肪细胞对外界机械损伤的抵抗力较强,可望成为整形外科中软组织缺损的有益填充物。所以,对其进行体外培养、探索其生物学特性有着重要意义。

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