2结果

    采用Trizol快速提取球后成纤维细胞中的总RNA，用15mL/L琼脂糖凝胶电泳（含有5mL/L溴化乙锭），可清晰见28S，18S，5S三条带。各组细胞总RNA的A260/280比值在1.8～2.0之间，说明提取的总RNA质量好，无明显降解，也无明显的DNA污染。正常人和TAO患者RF的CD40mRNA经RT-PCR，都可产生一条长度为330bp的电泳条带，而内对照GAPDH的电泳条带长度为452bp, CD40和GAPDH电泳条带的吸光度值比较显示，在正常人和TAO患者的RF有CD40mRNA的弱表达，400kU/L rhIFN-γ提高两者CD40mRNA表达水平。不同浓度rhIFN-γ作用48hCD40的吸光度比值（表1）。400kU/L rhIFN-γ作用不同时间CD40的吸光度比值（表2）。

    3讨论

    CD40是Ⅰ型跨膜蛋白。属于TNFR超家族成员。是B淋巴细胞重要的促有丝分裂受体。CD40最先发现于B淋巴细胞表面，但不仅表达于造血系统起源的细胞，而且存在于许多非造血系统起源的细胞如内皮细胞[3]、上皮细胞[4]以及成纤维细胞[5]等多种细胞表面。与Sempowski等[6]的结果一致，我们的研究表明正常人和TAO患者RF均表达CD40 mRNA。同时，他们用流式细胞学检查发现正常人和TAO患者RF表面表达结构性的CD40分子[6]。因此，可以推测RF与局部浸润的活化T淋巴细胞可能通过CD40与CD40L共刺激通路相互作用。一方面，引起更多的免疫细胞的激活；另一方面导致RF活化，产生TAO的病理组织学改变及典型临床表现。我们的研究表明正常人和TAO患者RF表达CD40mRNA无明显差异。说明无论正常人或TAO患者RF均可通过CD40接收和转导信号。与肺、齿龈、滑膜、皮肤、脾等解剖部位成纤维细胞类似[4]，IFN-γ可上调RF CD40 mRNA的水平。我们的结果显示rhIFN-γ诱导RF CD40mRNA的表达呈时间和剂量依赖性，但正常人和TAO患者RF在同一时间或同一浓度无明显差异。Sempowski 等[5]的报道也显示IFN-γ上调RF CD40 mRNA与其表面分子的表达水平是一致的。

    我们的研究证实体外培养的正常人和TAO患者RF都表达功能性CD40mRNA，rhIFN-γ可上调两者的CD40 mRNA的水平。而作为免疫作用的效应细胞和靶细胞的RF具有维持组织器官的结构，参与免疫反应，分泌细胞外基质蛋白的功能。因此，推测CD40对于维持眼眶正常组织功能具有重要意义；而在眼眶炎症微环境中，上调表达CD40的RF与活化的免疫细胞可通过CD40与CD40L的相互作用而激活，分泌细胞因子及大量的亲水性GAG，引起TAO的发生与发展。故CD40/CD40L可能代表着一个重要的RF活化通路，是TAO分子致病的基础。

【参考文献】
  1 Hufnagel TJ, Hickey WF, Cobbs WH, Jakobiec FC, Iwamoto T, Eagle RC. Immuno- histochemical and μltrastructural studies on the exenterated orbital tissues of a patient with Graves' disease. Ophthalmology , 1984;91(11):1411-1419

2 Chen M, Zhou XT, Sheng W, Qu J. Thyroid-associated ophthalmopathy: Laurent concepts regarding etiopathogenesis and management. Int J Ophthalmol (Guoji Yanke Zazhi) ,2006;6(4):875-878

3 Karmann K, Hughes CC, Schechner J, Fanslow WC,Pober JS. CD40 on human endothelial cells: inducibility by cytokines and functional regμlation of adhesion molecμle expression. Proc Natl Acad Sci U S A ,1995;92(10):4342-4346

4 Galy AH, Spits H. CD40 is functionally expressed on human thymic epithelial cells. J Immunol,1992;149(3):775-782

5 Fries KM, Sempowski GD, Gaspari AA, Blieden T,Looney RJ,Phipps RP.CD40 expression by human fibroblasts.Clin Immunol Immunopathol,1995;77(1):42-51

6 Sempowski GD,Rozenblit J,Smith TJ, Phipps RP. Human orbital fiboblasts are activated through CD40 to induce proinflammatory cytokine production. Am J Physiol,1998;274:c707-c714

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