2.2 兔角膜缘干细胞克隆化培养及传代
   接种于Swiss-3T3成纤维细胞 (丝裂霉素C处理2.5小时) 的角膜缘干细胞于接种48小时后开始形成克隆，细胞形态规则，排列均一。单个克隆培养第3日， 克隆团中细胞数目约为4个；第5日，克隆团中细胞数目明显增加；培养第7日，形成较大的克隆团；培养第10日，克隆团不断向周围扩张，逐步形成单层细胞(图4、5)。

 图.4  角膜缘干细胞原代培养第3日（×250）

图.5  角膜缘干细胞原代培养第10日（×250）  
2.3 冻存细胞复苏后的克隆形成率的比较
   有饲细胞的原代兔角膜缘干细胞冻存复苏后平均CFE为（0.43±0.22）％，而无饲细胞的角膜缘干细胞复苏率为（0.16±0.07）％，两者相差非常显著,T=3.007, P<0.01。
2.4 克隆化角膜缘干细胞的增殖细胞核抗原（PCNA）染色
   有饲细胞的兔角膜缘干细胞克隆团较大，染色明显，中央有数个细胞染色较深，细胞核仁区可见黄绿色荧光，周围背景呈暗绿黑色；而无饲细胞的细胞团较小，染色较浅，其间散在数个细胞有核染色。第3日克隆团细胞染色明显，呈绿色荧光；第6日细胞数量较多，中央染色明显；第9日细胞团成片状，细胞核心呈绿色荧光染色（图6）。

图.6  角膜缘干细胞克隆团培养第9日PCNA染色（×250）

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