2结果

  　  2.1外表及眼球表面 术后2～3d，术眼眼睑红肿轻，少量白色分泌物，术眼一般处于半睁状。移植的羊膜呈半透明状，表面光滑，结膜周围与羊膜贴覆好。术后1wk内逐渐变透明，结膜周围上皮在羊膜上呈向心性生长，同时亦伴随有较细小的新生血管向角膜长入经过17d（最短12d，最长30d）相继愈合。经过愈合的表面光滑、湿润、上皮层稳定。本实验结果显示：角膜缘干细胞移植治疗后，兔实验眼角膜上皮恢复完整性、新生血管减少、基质炎细胞浸润减少、透明性增加。

  　  2.2上皮层 正常的表层上皮细胞有明亮的、中等亮度和暗的3种表现。表皮细胞排列疏松,呈多角型,胞体发暗,边界清晰发亮，明亮的细胞核可见或不可见。角膜中央上皮基底细胞排列紧密,呈鱼卵状，胞体圆形，边界明亮,胞质和细胞核反光较明，大小一致。术后1mo后角膜上皮细胞排列整齐，光反射正常（图1A）。

  　  2.3基质层 基质层中,可看到在相对较暗的背景下明亮的角膜细胞核,被一些无一定形光反射状的背景物质分隔开,不能观察到胞质、细胞边界和胶原层。前基质细胞边缘欠清，胞核明亮呈纺锤形（图1B）；后基质角膜细胞核较长，相对前基质密度较低（图1C）；术后1mo基质细胞排列紊乱，散在的、反光较强的圆形物质，并产生反射较高的细胞外基质（图1D）。一些细胞呈梭形，基质产生点状与线形交织的瘢痕组织；基质层内有少量的新生血管，见红细胞在血管内流动（图1E）。

   　 2.4内皮层 内皮细胞呈规则的六边形(图1F),细胞边界呈黑色,胞体发亮,看不到细胞核，边缘发暗。与角膜内皮镜检查时的细胞形态相同,细胞密度越大者,六边形形态规则占的比例越大;反之, 细胞六边形越少,不规则形细胞比例增大。术后角膜内皮细胞形态及数量无明显变化。

    　1 免眼角膜缘干细胞缺乏羊膜移植后形态(LCM) A:术后1mo后角膜上皮细胞排列整齐，光反射正常；B:基质细胞边缘欠清，胞核明亮呈纺锤形；C:后基质角膜细胞核较长，相对前基质密度较低；D:术后1mo基质细胞排列紊乱，散在反光较强的圆形物质，并产生反射较高的细胞外基质；E:基质层内有少量的新生血管，见红细胞在血管内流动；F:内皮细胞呈规则的六边形，胞体发亮，边缘发暗

   　 3讨论

    引起角膜缘干细胞的缺陷有原发性和获得性原因。先天性无虹膜是一种遗传病，可能缺乏基质的支持而导致原发性干细胞的功能不全。更常见的干细胞缺陷是由获得性因素引起的，例如：化学伤或热烧伤、接触镜所致的角膜病、慢性角膜炎、角膜缘手术创伤、Stevens－Johnson综合征等。以上各种病因引起患者畏光、疼痛、角膜结膜上皮化、视力下降，甚至失明。本研究利用兔眼角膜缘干细胞缺乏制作临床常见的角膜干细胞缺陷模型，使用先进的海德堡视网膜断层扫描系统Ⅱ代(激光共焦显微镜)观察其羊膜移植后的表现。正常组激光共焦显微镜检查结果：角膜表皮细胞排列疏松,呈多角型,胞体发暗,边界清晰发亮，明亮的细胞核可见或不可见；前基质细胞边缘欠清，胞核明亮呈纺锤形；后基质角膜细胞核较长，相对前基质密度较低；内皮细胞呈规则的六边形,细胞边界呈黑色,胞体发亮,看不到细胞核，边缘发暗。角膜缘干细胞缺陷羊膜移植1mo后激光共焦显微镜检查结果：角膜上皮细胞排列整齐，光反射正常；基质细胞排列紊乱，散在的、反光较强的圆形物质，并产生反射较高的细胞外基质；一些细胞呈梭形，基质产生点状与线形交织的瘢痕组织；基质层内有少量的新生血管，见红细胞在血管内流动；角膜内皮细胞形态及数量无明显变化。本研究结果显示：角膜缘干细胞缺陷羊膜移植后，兔实验眼角膜上皮恢复完整性、新生血管减少、基质炎细胞浸润减少、透明性增加。

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