海德堡视网膜断层扫描系统Ⅱ代(HRTⅡ)是利用共聚焦激光的原理获取和定量分析眼后节三维形态的仪器,通过增加Rostock角膜模块组件(RCM),可转变成激光共焦角膜显微镜。HRTⅡ/RCM内部含有一个波长670nm的二极管激光源[1]。激光束聚焦在角膜,焦平面通过振荡镜周期性的移动,从而连续扫描获得角膜各层二维图像。光敏探测器可以测到每一点的光反射强度,仅有焦平面上的反射光及其周围的散射光可被探测器接收,而焦平面以外的反射光、散射光均被高度抑制,所以生成的二维图像是角膜上共焦平面所在位置的平面图像。共焦平面可以通过焦平面调解环进行手动调解,因此可获得角膜各个层面的图像,一系列不同共焦平面的图像组成了三维图像,真实的焦平面位置与获取的图像是同时储存的[2]。与传统的光学共焦显微镜相比,激光共焦显微镜具有许多优势:（1）由于激光特有的单色性和相干性[3],使图像清晰,分辨率高至1μm,极大提高了对角膜尤其是角膜缘疾病的诊断和基础研究的水平。（2）可以对病变进行确切的深度定位,可重复性好,有利于病变的前后对比。（3）独特的纵向断层扫描实现了对角膜病变的多层次立体观察,达到了类似组织切片的效果。（4）提供多种图像获取模式,不仅可对同一焦平面进行动态连续扫描,而且可对某一焦平面Z轴向后60μm深度进行动态连续扫描,实现了时间与空间的动态观察。（5）提供摄像头实时监测受检眼角膜位置,使检查更有效省时,大大减少了对患者角膜损伤的可能性。（6)可测量角膜各层次厚度。所以激光共焦显微镜为眼科医生提供了非常细致有效的角膜活体组织学检查,尤其使活体观察角膜缘结构成为可能。 用激光共焦显微镜获取的角膜中央各层次的图像均较传统的光学共焦显微镜在清晰度上有很大提高[4,5],另外,纵向断层扫描可同时获得2～3层的角膜细胞图像,达到类似组织切片的效果。

    　共焦显微镜的镜头是通过特制眼用胶接触受检查的角膜,因此对受检者无明显不适,易于被受检者接受,且是无创性的方法。本研究中利用激光共焦显微镜显示的角膜层间及基质及内皮数更为清晰,更有利于对病变的观察分析。在实践中也发现对眼窝深、睑裂小、配合不良的患者,应用激光共焦显微镜检查有一定困难。在检查中我们使用钢丝开睑器开睑,完全避免了眼睑运动所致的图像欠清晰的缺点。

   　 综上所述,我们首次应用激光共焦显微镜对兔眼角膜缘干细胞完全缺乏动物进行了观察,图像清晰,结果理想,可获得裂隙灯显微镜和传统光学共焦显微镜所无法获取的图像和效果。我们首次用共焦显微镜检查角膜各层细胞的变化,取得较好的结果。提示共焦显微镜是目前研究角膜的活体细胞变化及临床角膜病诊断的一种有用的工具。对屈光性角膜手术后的观察、角膜缘和角膜移植术后的观察、角膜感染的无创快速诊断、配戴角膜接触镜后的角膜状态随访等有着广阔的应用前景。

　　【参考文献】

　　1严宏,陈隆,朱宝义,哈文静,李养军.HRT-II在青光眼随访中的应用.国际眼科杂志,2006;6(3):635-636

　　2荣蓓,晏晓明.激光共焦显微镜对正常人眼角膜缘和中央角膜的观察.中华眼科杂志,2006;42(1):17-21

　　3 KobayashiA,Yoshita T，Sugiyama K. White-light and laser confocal microscopic findings of rabbit conjunctiva.Ophthalmic Surg Las Imag ,2004;35:146-148

　　4谢立信,史伟云,郭萍.正常人活体角膜组织结构的共焦显微镜观察.中华眼科杂志,2006;36:235-237

　　5 Mustonen RK，McdonaldMB，Srivannaboon S，Tan AL,Doubrava MW,Kim CK. Normal human corneal populations evaluated by in vivo scanning slit confocal microscopy. Cornea ,1998;17:485-492

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