2  结果

    2．1 基础泪液分泌量比较  灌胃前和灌胃4周后各组SIT测量值见表1。经协方差分析，各组治疗后SIT测量值比较差异有显著性（F＝34.187，P<0.01）。雄兔模型组（B）去势后生理盐水灌胃4周，基础泪液分泌量明显减少，滤纸湿长缩短，与去势后灌胃前有明显差异（t=17.033，P<0.01），C、D组去势后密蒙花提取物灌胃4周，基础泪液分泌量稳定，与去势后灌胃前比较差异无显著性（t＝1.195，t=0.349，P>0.05）。其中，C、D组滤纸湿长与B组比较增长明显（P均<0.01），E组去势后经染料木黄酮灌胃治疗，基础泪液分泌量虽有增加，滤纸湿长与B组比较增长明显（P均<0.01），但仍未达到去势前分泌状态，与空白组比较有明显差异（P<0.01）。

    2．2  泪腺局部炎症反应比较  A组雄兔泪腺组织排列整齐，未见细胞变性坏死，未见纤维组织增生及炎性细胞浸润。TGF-β1、IL-1β与TNF-α表达均不明显。B组雄兔去势后4周，泪腺组织排列紊乱，可见大量腺泡细胞变性坏死，坏死灶纤维组织增生，局部大量炎性细胞浸润。TGF-β1表达不明显，IL-1β与TNF-α大量表达于细胞膜和细胞浆中，呈棕黄色颗粒（见图1~图3）。C、D组雄兔经密蒙花提取物治疗后，泪腺组织镜下观较模型组好转，细胞变性数量减少，局部炎性细胞浸润不同程度减轻。TGF-β1表达增强，可见其大量表达于细胞膜和细胞浆中，呈棕黄色颗粒，IL-1β与TNF-α表达较B组减弱（见图4~图6）。E组雄兔经染料木黄酮治疗效果不明显，镜下观虽较B组好转，但仍可见细胞变性及坏死，部分切片仍可见炎性细胞浸润，可见TGF-β1明显表达，也可见IL-1β与TNF-α大量表达于细胞膜和细胞浆中，呈棕黄色颗粒（见图7~图9）。

    采用电子计算机图像分析技术检测各组泪腺细胞TGF-β1、IL-1β、TNF-α染色的平均光密度值，经多元方差分析，结果表明：各组的TGF-β1、IL-1β、TNF-α表达组间比较差异均有显著性（FTGF-β1＝6.777，FIL-1β＝36.805，FTNF-α＝34.403，P均<0.01）。其中，雄兔模型组（B）去势4周后IL-1β、TNF-α明显增强，与A组比较有明显差异（均P<0.01），C、D组去势后经密蒙花提取物灌胃治疗，TGF-β1表达较B组增强（P<0.05，P<0.01），IL-1β、TNF-α表达减弱 （P均<0.01）；E组去势后经染料木黄酮灌胃治疗，TGF-β1表达与B组比较无显著性增加（P>0.05），且IL-1β、TNF-α表达仍然较强，与B组无明显差异（P均>0.05），见表2。

    2．3  透射电镜观察结果  空白组（A组）：整个组织结构较好，泪腺上皮细胞内线粒体结构清晰，未见明显嵴丢失，核圆，核膜未见明显皱缩，未见炎性细胞。

    模型组（B组）：泪腺上皮细胞变性，局灶有坏死。胞浆内分泌颗粒电密度降低甚至溶解，呈脱颗粒现象，线粒体嵴丢失、空泡变，内质网轻度扩张，部分泪腺上皮细胞内出现较大的空泡，核膜皱缩，染色质块状分布（见图10），可见较多炎性细胞。

    1倍剂量密蒙花提取物治疗组（C组）：泪腺组织轻度水肿，未见坏死细胞，细胞水肿，泪腺上皮细胞内分泌颗粒丰富，仍有丝状改变，线粒体空泡变减轻，核膜轻度皱缩，边集不明显（见图11）。间质增宽，胶原纤维增多，间质内有少量炎性细胞。

    2倍剂量密蒙花提取物治疗组（D组）：组织结构较完整，未见坏死细胞，泪腺组织未见水肿。泪腺上皮细胞内分泌颗粒比较丰富，未见丝状改变，线粒体空泡变减轻，核较圆，膜轻度皱缩，染色质分布均匀，未见炎性细胞。

    染料木黄酮治疗组（E组）：整个组织结构较好，胞浆内线粒体嵴丢失较模型组减轻，分泌颗粒电子密度较低。核膜仍有轻度皱缩，染色质分布较均匀（见图12），间质内有少量炎性细胞。

    3  讨论

    对因治疗是任何疾病治疗的最佳方法。对于雄激素水平下降导致的干眼症，治疗关键无疑就是雄激素替代治疗。雄激素补充治疗虽然有效，但长期应用会造成许多不必要的副作用，因此，寻找一种雄激素替代药物，是眼科工作者亟待解决的一个问题。

    3．1  密蒙花提取物及其一些特性  眼是性激素作用的靶器官，已证实雄激素、雌激素、孕激素和催乳素受体广泛存在于人、兔和鼠的泪腺、睑板腺、角膜等眼表组织中[4]。密蒙花提取物中含有大量黄酮类物质，Nifli等[5]利用放射性示踪标记的方法研究还表明黄酮类物质是细胞膜雄激素受体的刺激物，可以与细胞膜雄激素受体结合发挥生物学效应，因此，密蒙花黄酮同样也可能与这些受体结合而发挥作用。

    由于雄激素、黄酮类物质均为杂环多酚类化合物，可以利用其化学结构的相似性，维持体内雄激素的正常水平，治疗某些雄激素水平下降导致的疾病，从而直接有益于雄激素水平下降所导致的干眼症。研究已证明某些黄酮类化合物具有拟雄激素作用[6]。Moyad[7]发现黄酮类物质不但对于治疗围绝经期妇女的骨质疏松有效，甚至对于因为前列腺癌采取雄激素剥夺疗法的男性患者的骨质疏松也有效。除此以外，Wu等[8]通过动物实验也发现染料木黄酮能够减少雄激素水平下降引起的骨质丢失。从上文可知，密蒙花提取物因其有高含量的黄酮类物质，所以可能直接产生拟雄激素活性作用，从而治疗干眼病。

    3．2  密蒙花提取物对兔泪腺局部炎症反应的影响

    泪腺局部炎症反应加重是雄激素水平下降所导致的直接后果，也是干眼症发病的重要机制。Sullivan等[9]研究发现，雄激素水平的降低可促进Sj?觟gren’s综合征（Sj?觟gren’s syndrome，SS）的进程并加重与之相应的泪腺的炎症以及睑板腺的功能障碍和干眼症症状。Toda等[10]的研究表明，雄激素治疗能增加雌性MRL/lpr鼠泪腺组织中TGF-β1的mRNA的水平，以及促进TGF-β1蛋白的聚集，而且TGF-β1量的增加能降低泪腺组织中IL-1β和TNF-α的mRNA的水平。这表明雄激素不但可通过细胞因子TGF-β1对眼的免疫反应进行调节，而且还可以抑制泪腺的免疫性损害[11]，减轻泪腺炎症。另外，2001年Solomon等[12]还发现干眼症患者泪膜和结膜IL-1β含量明显高于正常人。

    本实验研究表明，通过密蒙花提取物的干预，C、D组泪腺组织中TGF-β1表达显著提高，从而使IL-1β和TNF-α显著降低。IL-1和TNF-α是最重要的促炎因子[13]，因此减轻了泪腺局部的炎症反应，炎性细胞浸润消失，正常泪腺细胞得到保护，受损组织得以修复。对于雄兔来说，这可能与密蒙花提取物中黄酮类物质具有拟雄激素作用有关，黄酮类物质与泪腺组织中雄激素受体结合后，提高泪腺组织中TGF-β1的mRNA的水平，以及促进TGF-β1蛋白的聚集，从而进一步抑制促炎细胞因子IL-1、  TNF-α等的生成，促进组织修复，与Toda等[10]的实验结果相符合。而E组雄兔予以染料木黄酮干预，TGF-β1表达虽有提高，但IL-1β和TNF-α降低程度不及密蒙花提取物治疗组，可能是异黄酮类物质拟雄激素作用较密蒙花黄酮差，因此预防效果较差。

    近年来，雄激素在干眼症治疗中的作用逐渐得到重视，被认为是治疗干眼症的新方法。但是单纯应用雄激素治疗，可能会引起一些难以避免的副作用，例如女性男性化、粉刺等等，因此，寻求一种有效的治疗干眼症的雄激素替代品就显得较为重要。密蒙花提取物以其直接或间接拟雄激素的独特作用，可以在干眼症病程中起到独到的作用，值得进一步研究。

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