2　结果

　　2．1　肌苷调节RGC轴突生长　AF-1是视神经胶质细胞分泌的一种小分子量轴突生长因子，能诱导RGC轴突显著生长，L-15培养液则无此作用^［1，2］。以这两种因素分别作为阳性与阴性对照，我们发现肌苷有刺激RGC轴突生长的作用，经多次试验，发现其有效半量浓度(E-50）是10～15μmol／L，25～50μmol／L达最大活性，相当于AF-1活性60%。肌苷代谢产物Hypoxanthine，5’-IMP，除5’-IMP在100μmol／L有较低活性(较肌苷10μmol／L活性还低)外，其余均无刺激轴突生长的作用(图1)。

^**P＜0.01　^***P＜0.001

1　嘌呤对RGC轴突生长的影响

　　Fig．1　RGC　regenerate　axons　in　response　to　purines

　　Aden　(adenosine)，Ino　(inosine)，Hypo　(hypoxanthine)，5’-IMP

　　（5’-inosine　monophosphate)

^***P＜0.001

2　腺苷脱氨后刺激轴突生长

　　Fig．2　Adenosine，hydrolyzed　via　ADA，stimulates　outgrowth

　　ADA（adenosine　deaminase）0.4U／ml　and　DCF（deoxycoformycin）10μmol／L　　腺苷也有刺激轴突生长的作用(E50＝10～15μmol／L)，50～100μmol／L达最大活性，相当于AF-1活性60%(图1)。腺苷在ADA作用下，水解脱氨生成肌苷。应用ADA抑制剂DCF(10μmol／L)抑制ADA活性，使腺苷不能脱氨，可看到腺苷(100μmol／L)不仅显著抑制轴突生长，还降低细胞存活率(P＜0.001)。外源性ADA(0.4U／ml)对腺苷引起的轴突生长及细胞存活率均无影响(图2)。提示腺苷刺激轴突生长的作用有赖于腺苷水解脱氨。

　　2．2　肌苷刺激GAP-43表达增强　已知GAP-43是与神经生长相关的一种膜磷脂蛋白。应用GAP-43多克隆抗体技术，依肌苷，AF-1，L-15培养液各组对GAP-43荧光染色的强度分3组(无反应、中度染色、高度染色)，结果显示AF-1，肌苷两组高度染色细胞数较阴性对照L-15组分别增加高达8倍、5.5倍，而3组均显示轴突长度与染色强度一致。提示肌苷促进GAP-43表达增强。

　　2．3　肌苷与6-TG竞争性调节轴突生长　6-TG是嘌呤同类物，在PC-12细胞，已经发现6－TG阻断神经生长因子(nerve　growth　factor，NGF)引起的轴突生长，但不影响存活率。我们发现10μmol／L6-TG可完全阻断AF-1引起的RGC轴突生长，不影响细胞存活；阻断25μmol／L肌苷作用的50%，对100μmol／L肌苷无抑制作用。令人惊奇的是，100μmol／L肌苷可完全扭转10μmol／L6-TG对AF-1的抑制作用，恢复AF-1活性至其原有高度，且扭转后达到的活性高度显著高于100μmol／L肌苷本身的活性高度。提示肌苷与6-TG之间可能竞争性通过某个同样的途径而影响轴突生长。

　　2．4　肌苷可能通过的细胞内信息传递通路　进一步对引起CNS神经元轴突生长的细胞内信息传递通路进行研究，发现在离体RGC，有丝分裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated　protein　kinase　kinase，MAPKK)抑制剂—PD，磷脂酰肌醇激酶(phosphatidylinositol　3’ kinase，PI3K)抑制剂—LY，若分别使用，两者均可抑制肌苷刺激轴突生长活性50%，两者结合，则抑制肌苷活性100%。PD或LY单独使用均不对AF-1有影响，两者结合，也只有部分抑制作用。PD，LY均不影响存活率。

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