3　讨论

　　自从20世纪40年代发现了NGF以来，又发现了一系列作用于中枢及外周神经系统的神经营养因子，如NGF家族成员BDNF，NT3，NT-4／5，与NGF无同源性的神经营养因子如CNTF等，确认神经营养因子可用于CNS退行性疾病等的治疗。

　　我们在对AF-1，AF-2／3分离提纯及信息传递通路研究的同时，发现嘌呤，特别是肌苷对RGC轴突生长起积极调节作用，腺苷只有通过水解脱氨生成肌苷才能刺激轴突生长，否则若抑制腺苷脱氨酶活性，腺苷不仅抑制轴突生长，还加速细胞死亡。据Huan等报道，腺苷通过水解脱氨成肌苷对星形细胞起保护作用^［3］。Wakada等报道，腺苷抑制鸡胚胎交感神经元生长，并致使NGF支持的80%交感神经元死亡，腺苷脱氨酶抑制剂强化腺苷的上述神经毒性作用，肌苷则无此毒性作用^［4］，从另一个侧面印证我们的发现，腺苷若不能水解脱氨，不仅抑制神经元轴突生长，还加速细胞死亡。

　　6-TG属嘌呤类物质，Greene及其同事们发现6-TG通过选择性抑制蛋白激酶N（protein　kinase　N，PKN)，阻断NGF通过激活PKN进而诱导神经元生长，但不影响细胞存活率^［5，6］。我们的结果显示，肌苷与6-TG之间有浓度依赖关系，10μmol／L6-TG能完全阻断AF-1的生物学活性，阻断25μmol／L肌苷刺激轴突生长作用的50%，对100μmol／L肌苷无作用，而100μmol／L肌苷能完全扭转6-TG对AF-1的抑制，使其活性恢复至原有高度，且超过100μmol／L肌苷本身的活性，提示肌苷可能与6-TG竞争PKN而对神经元起调节作用。

　　虽然至今对神经营养因子的研究已趋深入，但对其细胞内信息传递机制还不十分清楚。已知MAPK，PI3K是信息传递通路中的两个关键酶，PD，LY分别是它们的抑制剂^［7，8］。它们分别使用，各抑制100μmol／L肌苷活性50%，结合使用，则阻断作用达100%，对细胞存活无影响。提示肌苷在通过PKN后，还有可能通过MAPK，PI13K两途径。

　　GAP-43是与神经生长与可塑性有关的重要膜磷脂蛋白^［9］，在低等脊椎动物及哺乳动物，神经生长期间伴随GAP-43表达增强^［10］，肌苷可刺激GAP-43表达增强，提示肌苷有刺激轴突再生的作用。肌苷是否具有促进CNS神经再生的临床使用价值，有待进一步探索。

　　1，Schwalb JM，Boulis NM，Gu MF，et al．Two factors secreted by the goldfish optic nerve induce retinal ganglion cells to regenerate axons in culture．J Neurosci，1995，15∶5514

　　2，Schwalb JM，Gu MF，Stuermer CAO，et al．Optic nerve glia secrete a low molecular weight factor that stimulates retinal ganglion cells to regenerate axon in goldfish．Neuroscience，1996，72∶901

　　3，Huan SE，Segeleon JE，Trapp VL，et al．Inosine mediates the protective effect of adenosine in rat astrocyte cultures subjected to combined glucose-oxygen deprivation．J Neurochem，1996，67∶2051

　　4，Wakade TD，Palmer KC，McCauley R，et al．Adenosine-induced apoptosis in chick embryonic sympathetic neurons：a new physiological role for adenosine．J Physiol，1995，488∶123

　　5，Volonte C，Rukenstein A，Loeb DM，et al．Differential inhibition of nerve growth factor responses by purine analogues：correlation with inhibition of a nerve growth factor-activated protein kinase．J Cell Biol，1989，109∶2395

　　6，Volonte C，Loeb DM，Greene LA．A purine analog-sensitive protein kinase activity associates with trk nerve growth factor receptors．J Neurochem，1993，61∶664

　　7，Alessi DR，Cuenda A，Cohen P，et al．PD 098059 is a specific inhibitor of the activation of mitogen-activated protein kinase kinase in vitro and in vivo．J Bio Chem，1995，270∶27489

　　8，Parrizas M，Saltiel AR，le Roith D．Insulin-like growth factor 1 inhibit apoptosis using the phosphatidylionositol 3’-kinase and mitogen-activated protein kinase pathways．J Bio Chem，1997，272∶154

　　9，Benowitz LI，Routtenberg A．Gap-43：an intrinsic determinant of neural development and synaptic plasticity．Trends Neurosci，1997，20∶84

　　10，Berry M，Carlile J，Hunter A．Peripheral nerve explants grafted into the vitreous body of the eye promote the regeneration of retinal ganglion cell axons severed in the optic nerve．J Neurocytol，1996，25∶147

(收稿：1999－06－23　修回：2000－01－15)

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