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讨论
一、RCS大鼠视网膜视细胞凋亡初期p53基因高表达
RCS大鼠系在英国皇家外科学院（Royal College of Surgeons）最早培育成功而得名。1938年已确定此鼠有遗传性视网膜变性，以后确定为常染色体隐性遗传性视网膜变性，基因型为rdy,是目前研究某些形式的视网膜色素变性、遗传性黄斑变性及脉络膜缺损等疾病的动物模型。尽管RCS大鼠的基因缺陷尚未确定，但已确定此缺陷基因特异性影响视网膜色素上皮细胞，导致其不能吞噬视细胞外节脱落的膜盘，进而导致视细胞变性死亡［4］。膜盘堆积导致视细胞死亡的机制目前尚不清楚，但已确定视细胞死亡是以细胞凋亡的形式进行［2］。我们用TUNEL方法进一步确定了视细胞凋亡的时间，发现视细胞凋亡的高峰期是生后第30～35天。在此基础上，用免疫组织化学染色、原位杂交及RT-PCR方法研究视细胞凋亡过程中p53基因的表达，在生后第28～30天，即视细胞凋亡的初期，视细胞内p53蛋白和mRNA水平均显著升高，提示p53基因可能参与视细胞凋亡的启动。
二、RCS大鼠视网膜视细胞p53蛋白表达特点
p53蛋白是一种磷酸化蛋白，具有转录因子的活性。它在细胞质内合成，细胞核内发挥作用，与特定的基因序列结合，发挥转录因子作用，上调或下调某些基因表达，产生细胞效应。p53基因的主要生物学功能是引起细胞周期阻滞，诱导细胞凋亡和分化。特别是细胞DNA受损断裂后，影响细胞周期调控点，使细胞停滞在G1期或G2期［5］。通常情况下，在正常或非转化细胞中，p53蛋白水平较低且半衰期很短，用免疫组织化学染色很难检测到。因此，免疫组织化学染色检测p53蛋白阳性，常提示p53蛋白有异常高表达。正常SD大鼠视网膜p53蛋白免疫组织化学染色为阴性，而RCS大鼠生后第25～35天，视细胞内p53蛋白染色阳性，特别是生后第28～30天，p53蛋白阳性染色显著增强，提示p53蛋白有异常的一过性高表达。p53蛋白高表达的时间正是大量视细胞发生凋亡的前期，提示p53蛋白可能参与视细胞凋亡的启动。p53蛋白阳性染色颗粒主要位于贴近细胞核的视杆内节胞浆内，为何在此出现目前还难以解释，可能与内节是视细胞合成蛋白质的主要部位有关。p53蛋白合成后进入细胞核发挥作用，我们在大量RCS大鼠视网膜标本中发现，视细胞核的阳性染色有逐渐增加趋势，提示视细胞内的p53蛋白也是进入细胞核发挥作用，但可能因此种p53蛋白为野生型蛋白，进入细胞核后很快被降解，故较难检测。
三、RCS大鼠视网膜视细胞p53 mRNA表达特点
原位杂交检测同样显示，在RCS大鼠视细胞凋亡的初期，p53mRNA水平显著升高，与p53蛋白免疫组织化学染色的研究结果相符。用敏感的RT-PCR方法检测视网膜p53 mRNA也发现，RCS大鼠出生后25～35天的视网膜p53 mRNA扩增产物量偏高。但在其它时期的RCS大鼠和正常SD大鼠视网膜，也有少量p53 mRNA扩增产物，提示正常情况下视网膜有低水平p53 mRNA存在。
本研究表明，正常情况下视网膜可有低水平的p53基因表达。在RCS大鼠视网膜视细胞凋亡的初期，视细胞p53基因出现异常的高表达，与其细胞凋亡有显著的相关性。然而，目前的研究结果尚不能确定p53基因高表达是否直接引起视细胞凋亡，有待进一步研究。本研究认为，RCS大鼠视网膜视细胞p53基因高表达可能参与视细胞凋亡的启动调控。
参考文献
1 Chang GQ, Hao Y, Wong F. Apoptosis: final common pathway of photoreceptor death in rd, rds, and rhodopsin mutant mice. Neuron, 1993, 11: 595-605.
2 Tso MOM, Zhang C, Alber AS, et al. Apoptosis leads to photoreceptor degeneration in inherited retinal dystrophy of RCS rats. Inves Ophthalmol Vis Sci, 1994, 35: 2693-2699.
3 Gavrieli I, Sherman Y, Ben-Sasson SA. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation. J Cell Biol, 1992, 119: 493-501.
4 Edwards RB, Szamier RB. Defective phagocytosis of isolated rod outer segments by RCS rat retinal pigment epithelium in culture. Science, 1997, 197: 1001-1003.
5 Hollstein M, Sidransky D, Vogelstein B, et al. p53 tumor suppressor gene. Nature, 1991, 531: 453-456.
(收稿日期：1999-02-10) 上一页 [1] [2] [3] |
