中华眼科杂志 2000年第1期第36卷 论著

作者：周跃华　李志辉　安伟丽　George Chiou

单位：周跃华(首都医科大学附属北京同仁医院眼科　100730)；李志辉(首都医科大学附属北京同仁医院眼科　100730)；安伟丽(首都医科大学附属北京同仁医院眼科　100730)

关键词：葡萄膜炎；白细胞介素-1；肿瘤坏死因子

　　【摘要】　目的　观察人工合成的白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)受体阻断剂对大鼠葡萄膜炎的治疗作用。方法　选择18只(36只眼) Sprague-Dawley大鼠，采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)的方法，对人工合成的IL-1受体阻断剂治疗前、后的大鼠葡萄膜炎动物模型的视网膜内IL-1 β和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α, TNF α)的含量进行测定。结果　IL-1受体阻断剂(CK-138，CK-139)治疗组，其视网膜内IL-1 β和TNF α的含量均显著低于对照组的含量(P＜0.05) 。结论　人工合成的IL-1受体阻断剂(CK-138，CK-139)对IL-1 α所诱导的大鼠葡萄膜炎有一定的治疗作用。

Effects of synthetic interleukin-1 blockers on

　　uveitis in rats

ZHOU Yuehua, LI Zhihui, AN Weili

　　（Department of Ophthalmology, Tong Ren Hospital, The Capital University of Medical Sciences, Beijing 100730，China）

　　【Abstract】　Objective　To investigate the therapeutic action of synthetic interleukin-1 blockers on uveitis in rats. Method　Experiments were performed on 18 Spraque-Dawley rats (36 eyes), and the retinal interleukin-1 β (IL-1 β) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) were quantified by an enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA) before and after the rats with uveitis treated by synthetic interleukin-1 blockers. Result　The retinal IL-1 β and TNF-α in rats with uveitis treated by synthetic IL-1 blockers (CK-138, 139) were significantly decreased than those treated by contrasting design. Conclusion　Synthetic IL-1 blockers (CK-138, 139) are effective in treatment of IL-1 α induced uveitis in the rat.

　　【Key words】　Uveitis；Interleukin-1 ； Tumor necrosis factor

　　葡萄膜炎是一种常见的眼科疾病。目前的许多研究发现，其发病与炎性细胞因子如白细胞介素-1、6、8(interleukin-1、6、8，IL-1、6、8)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α, TNF α)有关^［1-4］。 本实验以玻璃体内注射一定的IL-1 α的方法，诱发大鼠的葡萄膜炎。许多研究人员均将其作为研究葡萄膜炎药物治疗的有效模型之一^［3，4］。本实验通过视网膜内炎性细胞因子IL-1 β和TNF α的测定作为评价标准，对人工合成的IL-1阻断剂的药理作用进行观察。

　　材料与方法

　　1.动物：选择雌性Sprague-Dawley大鼠18只（36只眼），体重250～300 g。将其分为3组，每组6只大鼠(12只眼)。

　　2.动物模型：实验鼠采用盐酸氯胺酮35 mg/kg加盐酸甲苯噻嗪5 mg/kg肌肉注射进行麻醉，以30号针头向玻璃体内注射1 g/L的IL-1 α共10 μg，诱发葡萄膜炎，然后使大鼠从麻醉中恢复。根据本实验室常用的方法^［3，4］，分别于IL-1 α注射后0和14 h，从腹腔内注射10 mg/kg剂量的IL-1 α受体阻断剂CK-138、CK-139(美国德克萨斯A与M大学医学院眼科药物研究所提供)；对照组则注射同体积的用于溶解CK-复合物的试剂，即二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)。

　　3.样本收集：IL-1 α注射后6和24h，将大鼠再次麻醉，取出整个视网膜，用pH值为7.4的PBS冲洗。然后将其放入加有250 μl PBS的离心管内，置-80℃冷冻1 h，取出后快速匀浆，再离心(150 g)10 min，吸取上清液置于-80℃保存备用。

　　4.实验药物：dihydropyridazinopyridazin 的衍生物(CK-138、CK-139)，即一种人工合成的IL-1 α受体阻断剂^［5，6］。IL-1 α和DMSO均购于美国Sigma公司。测定IL-1 β和TNF α含量的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）试剂盒均购于美国Endogen公司。

　　5.IL-1 β和TNF α的测定方法：采用ELISA方法进行定量测定。采用美国产酶标仪(kinetic microplate reader)在450和550 nm的条件下进行读数。

　　6.统计学方法：所有数据均应用Microsoft excel进行t检验。

　　结果

　　1.IL-1 β的测定（表1）：CK-138治疗组，在IL-1 α注射后6 h，视网膜内IL-1 β的含量与对照组比较，差异无显著性(t=2.194, P=0.053)；在IL-1 α注射后24 h，其差异有显著性(t=2.869, P=0.017)。CK-139治疗组，在IL-1 α注射后 6 h和24 h，视网膜内IL-1 β的含量与对照组比较，差异均有显著性(t=3.726, P=0.004；t=2.491, P=0.032)。而CK-138和CK-139治疗组间比较，在IL-1 α注射后 6 h(t=-1.305, P=0.221)和24 h(t=1.135, P=0.283)，其差异均无显著性。

表1　IL-1 α注射后6 h及24 h鼠视网膜内IL-1 β含量的测定

组别	IL-1 β含量（±s，ng/L）
	IL-1 α注射后6 h	IL-1 α注射后24 h
对照组	1 456.33±467.23	2 920.17±487.22
CK-138	929.32±357.67	1 817.83±810.55*
CK-139	733.12±　88.20*	2 248.50±455.37*

　　^* 与对照组比较，P＜0.05

　　2.TNF α的测定（表2）：CK-138治疗组，视网膜内TNF α的含量与对照组比较，在IL-1 α注射后6 h(t=1.516, P=0.160)和24 h(t=-0.496, P=0.631)，其差异均无显著性。CK-139治疗组，在IL-1 α注射后6 h，视网膜内TNF α的含量与对照组比较，差异有显著性(t=2.691, P=0.023)；在IL-1 α注射后24 h，其差异无显著性(t=-0.080, P=0.631)。而CK-138和CK-139治疗组间比较，在IL-1 α注射后 6 h(t=-1.637,P=0.125)和24 h(t=0.456, P=0.658)，其差异均无显著性。

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