3　讨论

　　3．1　RPE细胞凋亡与氧化损伤　HX／XO反应是生物体自身的一种反应，产生主要以氧自由基为主的各种活性氧，所以选择该系统作为氧化剂，产生氧化损伤的模型是有代表性的。研究表明［4］，诱导凋亡的因子很多是氧化剂或细胞氧化代谢的刺激剂。为了进一步证实牛RPE细胞在氧化损伤后早期存在凋亡，我们选择了原位末端标记技术，该项技术与DNA凝胶电泳相比，在凋亡早期研究中，对DNA断裂的检测比较敏感。我们发现牛RPE细胞核有DNA的断裂的存在，从而证实氧化损伤确实可造成RPE细胞的凋亡。

　　3．2　p53基因与氧化损伤　p53基因被称为凋亡基因，野生型p53蛋白是一种细胞生长的负调控因子，它通过反式激活WAF1／CIP1基因的转录，抑制CDK（cyclin-depedent　kinase）激酶激活，阻断细胞周期或直接抑制c-fos，c-jun等基因的转录［5］，抑制多种细胞的生长。DNA损伤引起的细胞凋亡过程中，野生型p53基因是必需成分［6］。p53蛋白诱发RPE细胞凋亡可提供一防护机制，使受损细胞不能存活。本研究发现，氧化损伤可导致RPE细胞p53蛋白和mRNA表达增强。由于mRNA不同于蛋白质，其主要存在于细胞浆中，蛋白质则是由mRNA翻译而来，因此，在正常对照组中，虽有少量p53mRNA，但因野生型的p53蛋白半衰期短，并不一定在细胞核上观察到p53蛋白的表达。

　　本研究显示氧自由基可造成培养的牛RPE细胞中凋亡细胞增加，并进一步证实了p53基因可能促进细胞凋亡的作用，为今后防治与RPE相关眼病提供了一定的理论依据。

　　本课题受北京市自然科学基金资助，基金号　7962007

　　4　参考文献

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　　[2]　Augustin AJ，Hunt S，Breipohl W，et al．Influence of oxygen free radicals and free radical scavengers on the growth behaviour and oxidative tissue damage of bovine retinal pigment epithelium cells in vitro．Graefe′s Arch Clin Exp Ophthalmol，1996，234：58-63．

　　[3]　姜泊，张亚历，周殿元．分子生物学常用实验方法．第二版．北京：人民军医出版社，1997．57-58．

　　[4]　Thomas MB，Paul AS．Oxidative stress as a mediator of apoptosis．Immunology Today，1994，15：7-10．

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（收稿：1998-07-16　修回：1998-11-11）

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