【摘要】  目的 通过早期的动物实验研究，为应用半导体激光治疗弱视提供能量强度的参考范围。方法 取豚鼠90只，雌雄不限，随机分为正常对照组A，2 mW激光处理组B， 3 mW处理组C，4 mW处理组D和5 mW处理组E，每个处理组根据照射次数的不同又分为每天一次组J，每天两次组K，加对照组共9组。每组实验动物暗适应12 h后，进行处理前闪光视网膜电图（flash electroretinogram，fERG）检测。根据各组功率及照射次数的不同，用LL-300型半导体激光弱视治疗仪经瞳孔照射眼底视网膜。实验处理结束时，以同样方法再次进行fERG，对比处理前后ERG的变化。结果 与实验前相比，不同照射功率组间a波振幅变化有统计学意义（P<0.05），其中C组实验处理后a波振幅值较处理前明显升高，而D组和E组实验处理后a波振幅略有降低；b波及N1-P1波振幅改变无统计学意义(P>0.05)。结论 豚鼠视觉感受器细胞对于不同功率照射会产生不同反应，实验前后 3 mW照射组a波幅值升高，4 mW和5 mW照射组下降。视网膜其他细胞层并未产生明显的电生理变化。

【关键词】  半导体激光 膜 网膜电图

 上世纪80年代，我科曾尝试应用低功率氦氖激光治疗弱视，并取得较好效果[1]。与氦氖激光相比，半导体激光既有与其相似的光学特性，更有光电转化效能高、操作简便、适合家用等优点。但是半导体激光经瞳孔直接照射眼底视网膜，是否会对眼的屈光间质及视网膜结构造成损伤，长期的能量累计是否引起眼部结构的远期损伤，这些都尚存疑问和争议。本实验通过对豚鼠眼进行半导体激光经瞳孔照射，观察其视网膜电生理功能学改变，来推测照射后损伤变化，以期为进一步的临床观察和应用提供能量强度的参考范围。

    1  材料与方法

    1.1  材料

    1.1.1  实验对象  正常豚鼠90只，体重100～   150 g，雌雄不限，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。

    1.1.2  实验材料  LL-300型半导体激光弱视治疗仪（由武汉雷纳光电技术有限公司提供），发射波长635 nm，功率有2 mW、3 mW、4 mW、5 mW四种，光斑直径5 mm。PE-400型ERG/VEP电生理测试仪（由日本Tomey公司生产）。

    1.2  方法

    1.2.1  分组  根据照射功率的不同，按随机数字法将实验动物随机分组，即正常对照组A，2 mW处理组B，3 mW处理组C，4 mW处理组D和5 mW处理组E，设定每天照射一次为J，每天照射两次为Ｋ，每个处理组根据照射次数的不同又分为BJ、BK，CJ、CK，DJ、DK，EJ、EK，加对照组共9组，每组10只。

    1.2.2  闪光视网膜电图（flash electroretinogram，fERG）检测

    1.2.2.1  角膜电极的制作  取直径0.2～0.3 mm的银丝，浸入1％的84消毒液中（主要成分为次氯酸钠，通过与银离子发生离子置换，生成氯化银）24 h即可制成氯化银丝，依据豚鼠角膜大小将其做成直径约4~5 mm的角膜接触线圈。

    1.2.2.2  电极的安放  角膜接触电极置于待测眼的角膜缘，另外将不锈钢针制成参考电极及接地电极，分别插在待测眼同侧的面颊部和后腿[2]。

    1.2.2.3  每组实验动物暗适应12 h后，用1.25％的复方托品卡胺滴眼液扩瞳，2%水合氯醛腹腔注射麻醉，用自制固定架固定，0.1％丁卡因角膜表面麻醉，暗红光下安放电极。进行处理前ERG检测，记录暗视标准混合反应（Max-R），应用白色光作为刺激， 刺激频率2 Hz，刺激光强度1.5 cd·s／m2。之后在25 cd／m2背景光下经过30 min明适应，记录30 Hz时的ERG（30 Hz-Flick），同样应用白色光作为刺激，刺激频率为30 Hz，刺激光强度为1.5 cd·s／m2，记录反应时各波振幅及潜伏期。以同样方法，在实验处理结束时（30 d后），再次进行处理后fERG检测。

    1.2.3  实验处理  由内部定时装置将LL-300型半导体激光弱视治疗仪照射时间额定为3 min。用自制固定架固定豚鼠四肢，并做内、外直肌牵引线固定眼球，根据各组功率及照射次数不同，用LL-300型半导体激光弱视治疗仪经瞳孔照射眼底视网膜，光束垂直于角膜顶点部，视网膜距离光源约33 cm，每次3 min，持续30 d。每天照射一次组（J组）在早上进行操作，每天两次组（K组），分别在早上和下午进行操作。每组动物均在相同光线条件下正常喂养，其间用0.25％阿托品滴眼液扩瞳，每天1次，持续7 d。

    1.3  实验结果测定　　检测实验前后暗视标准混合反应中a波及b波潜伏期，a波及b波振幅值，对比实验前后潜伏期及振幅的改变；检测实验前后明视闪烁光30 Hz反应波振幅值，对比实验前后其振幅的改变。

    1.4  数据统计处理  以每个个体试验前后各波振幅及潜伏时的差值作为参数（即某研究对象X的参数＝a/b振幅pre-experiment－a/b振幅post-experiment），运用SPSS 13.0统计软件进行方差分析。

    2  结果

     各组fERG检测的详细指标见表1，对照组和  5 mW组的fERG图形见图1~图4。

    2.1  a波振幅值  不同功率对于实验前后a波振幅值变化的影响有统计学意义（F=3.91，P=0.01），其中C组与D组间差异有显著性（F=8.75，P=0.002），C组与E组间差异有显著性（F=4.83，P=0.025）。不同照射次数对于实验前后a波振幅值的变化影响无统计学意义（F=0.09，P=0.76）。照射功率与次数的交互效应对其影响也无统计学意义（F=0.58，P=0.63）。

    2.2  a波潜伏期  不同照射功率及次数对于实验前后a波潜伏期变化的影响无统计学意义（F=2.39，P=0.74；F=2.72，P=0.10）。照射功率与次数的交互效应对其影响也无统计学意义(F=1.07，P=0.37）。

    2.3  b波振幅值  不同照射功率及次数对于实验前后b波振幅值的变化影响无统计学意义（F=1.24，P=0.3；F=0.18，P=0.67）。两者交互效应对于b波振幅值的变化影响无统计学意义（F＝1.74，P＝0.16）。

    2.4  b波潜伏期  不同照射功率实验前后b波潜伏时的变化影响无统计学意义（F=2.32，P=0.08）。不同照射次数对于其变化影响差异有显著性（F=6.09，P=0.02），两者交互效应对于其变化影响无统计学意义（F=0.25，P=0.86）。

    2.5  N1-P1波振幅值  不同照射功率及次数对实验前后N1-P1波振幅值的变化影响无统计学意义（F=1.63，P=0.19；F=0.06，P=0.80）；两者的交互效应对于其变化无统计学意义（F=1.21，P=0.31）。

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