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3 细胞的培养
细胞培养分原代和传代培养，细胞培养营养液较常用的有M199、DMEM〔12，13〕等，其中以DMEM最为常用。同时加入一定量的抗生素和抗霉素以预防污染。Mourad等发现BSSPlus溶液和HLR溶液比BSS溶液更有利于保持培养内皮细胞的存活力。培养细胞经4h悬溶后，在BSS溶液中细胞死亡率为8.7%h-1，BSSPlus溶液中细胞死亡率为3.3%h-1，HLR溶液细胞死亡率为8.4%h-1，乳酸盐和糖一样适合保持培养内皮细胞的存活力〔17〕。
细胞培养在原代、传代时营养液一般都需要添加血清，较常用的血清有胎牛血清、新生牛血清、人血清等〔10，17，18〕，Gajdusck等认为营养液须加入一定浓度血清的原因是血液凝固过程中血小板聚集时所释放的各种生长因子有刺激内皮细胞生长的作用，尤其是血小板能够释放一种血小板衍生的生长因子(PDGF)〔19〕。有研究表明在含肝素的人血清有利于内皮细胞的生长，因为它可以抑制Ⅷ因子免疫反应细胞的生长〔20〕。
不同的培养基成发对内皮细胞的生长也有影响〔21、22〕，Capetands等认为内皮细胞最合适的营养基是纤维连接蛋白或透明质酸包埋的培养容器、培养液为DMEM中加入20%的人血清和一定浓度的肝素，在这种培养基下原代培养可得到较纯的内皮细胞并且能在传代培养中保持长时间稳定的形态结构，而周细胞在原代培养中最合适的培养基是明胶包埋的培养容器，培养液为DMEM加入20%胎牛血清〔23〕。Grant等发现纤维连接蛋白碎片有调节培养内皮细胞的增殖和分裂的作用〔24〕。
在培养内皮细胞时如果有周细胞等其他细胞的夹杂，会对内皮细胞的代谢、增殖和其他特性有影响。Orlidge等研究表明，在培养液中血管周细胞或平滑肌细胞能抑制内皮细胞的增殖，甚至当周细胞或平滑肌细胞与内皮细胞比例降低到1：10时也能产生抑制作用，这可能是因为周细胞或平滑肌细胞释放TGF-β，并与内皮细胞接触有关〔25，26〕。
此外培养箱的环境也能影响细胞的增殖，Yanqin等发现传代培养时缺氧环境能刺激培养内皮细胞的增殖并发生形态改变，细胞数在缺氧环境中第1、4、5天超过在正常环境中的细胞数(缺氧环境为2%O2，5%CO2，93%N2；正常环境为95%空气，5%O2)，细胞数平均增加121%～181%。3H掺入后通过自显影法表明在缺氧环境中细胞数有112%～118%的增多，只是在缺氧环境中内皮细胞较小，显梭形，而在正常环境中细胞较大、显多角多边形〔27〕。还有研究表明，在传代培养8～12天后缺氧环境中细胞的增殖才和正常环境中内皮细胞的增殖没有差别〔28〕。这种缺氧导致细胞形态变化的机制目前尚不清楚，可能是一些细胞支架如酸、微管等组织的重新分布，这些改变都可能导致细胞增殖能力的改变〔27〕；缺氧同时还可以导致内皮细胞产生一些糖蛋白产物，导致内皮细胞糖被膜的破坏，从而改变细胞的渗透性〔29，30〕。
4 细胞的鉴定
通常有两种方法，第一种是由Gimbrone等提出，他认为内皮细胞有两大特点：内皮细胞有W-P小体和第Ⅷ因子相关抗体(FⅧr-Ag)存在〔31〕。W-P小体仅见于内皮细胞，被认为是鉴定内皮细胞的最好形态学指标。FⅧr-Ag除见于内皮细胞外，还见于巨核细胞和血小板内，也被认为是鉴定的可靠指标。Vanger和Jaffe等还发现FⅧr-Ag是由内皮细胞合成并存储在胞质内的W-P小体中〔32，33〕，此鉴定多采用间接免疫荧光法。第二种方法是乙酰化低密度脂蛋白(AC-LHL)受体的检测〔34〕，多采用直接掺入法。当培养细胞中加入1-二甲基氨基-5-磺酰氯荧光素标记LDL时，如果细胞的胞核周围胞质呈强黄色荧光，表明存在LDL。
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