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3讨论
1990年，Oren等[4]分离出一种对人淋巴瘤细胞系表现出抗增殖作用的mAb，后续研究发现这种抗体对多个淋巴细胞系都可以产生抗增殖效应，还可以识别一种分子质量为26kDa的细胞表面蛋白，他们据此把这种被识别的蛋白称作抗增殖抗体的靶单位1（the target of the antiproliferative antibody1, TAPA1），1994年被统一命名为CD81[5]。人CD81包含236个氨基酸，分子质量为25.8kDa，整个分子4次跨越细胞膜，构成2个细胞外亲水环和3个很短的胞质区[6]。研究表明，CD81分子在机体中表现出增殖调控、迁移调控、免疫共刺激效应等多种效应[7]，其中CD81抗体对细胞增殖活性的抑制作用最为引人注目。以体外培养的神经胶质细胞和神经元为观察对象的研究[8,9]显示，CD81的增殖抑制效应由细胞之间的接触而触发；这些研究结果提示，体外培养细胞达到一定密度后，细胞之间发生接触，CD81与相邻细胞膜表面的受体结合后，分子构型发生改变从而触发了细胞的增殖抑制因子，使细胞得以保持合理的数目。而培养液中游离的抗CD81抗体可以代替CD81的受体与分子结合，达到抑制细胞增殖的效应。对胚胎小鼠及CD81基因敲除小鼠大脑的观察[10]更为有力的证明CD81分子是胚胎发育期神经胶质细胞的接触性增殖抑制过程中不可或缺的重要因素。可见，CD81是细胞增殖的接触性抑制过程中一个关键性调节因子。
视网膜结构和功能的稳定是维持正常视功能的重要前提，创伤或病变后的视网膜RPE和Müller细胞等的增殖可以诱发增殖性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy, PVR），严重损害视功能。但是，机体本身也存在着接触抑制等对愈合过程中细胞增殖的调节机制，掌握和利用这一机制也许可以减轻PVR等病变对视功能的损害。我们的前期实验已经证实，抗CD81抗体可以抑制体外培养大鼠RPE细胞的增殖活性[2]，提示CD81分子可以参与对RPE细胞增殖活性的调控，因此，了解CD81在正常和创伤视网膜中的表达有着不容忽视的必要性。本研究的目的就是初步观察CD81在正常大鼠RPE层的表达。我们应用抗CD81单克隆抗体EAT2对正常大鼠眼球的冰冻切片进行了免疫组化染色，结果发现，RPE细胞膜表面呈CD81阳性染色。另外，尽管RPE层CD81的阳性染色不是很强，但与其相连续的虹膜和睫状体色素上皮细胞的细胞膜上都有CD81的高表达，这也提示尽管表达的量可能低于虹膜和睫状体色素上皮，但RPE层应该为CD81阳性。Clarke 等[3]曾经应用自己合成并鉴别的CD81 mAb AMP1对大鼠RPE进行免疫组化染色，结果与本实验结果基本符合。
为了进一步确定CD81在视网膜中的表达，我们应用Western Blot对大鼠RPE蛋白CD81的表达进行了鉴别，结果应用非还原性样品缓冲液的蛋白在26 kDa处出现了阳性条带，而加入还原性样品缓冲液的蛋白则呈阴性表达。由于分子中第2个细胞外环内存在以二硫键连接的半胱氨酸，一旦加入还原剂这一结构就会受到破坏[6]，所以CD81对于还原剂极为敏感，在还原状态下呈阴性表达是CD81的一个重要特点。因此，我们的Western blot分析结果表明，在正常大鼠的RPE层有CD81蛋白的表达。为了对这一点获得进一步确认，我们进行了大鼠RPE的细胞培养，并用抗CD81 mAb EAT2对体外培养的RPE进行免疫组化染色，结果发现，体外培养RPE的细胞膜上有CD81阳性表达，在细胞间接触位点最为显著，这与CD81在体外培养角化上皮细胞[11]及肝脏星形细胞[12]的分布基本一致。上述研究结果表明：视网膜RPE确实可以表达CD81，而CD81很可能通过接触性抑制机制在视网膜发育和创伤愈合过程中参与了对RPE增殖的调控。
【参考文献】
1曹利群,刘敬,卢华,等.抗CD81抗体对培养大鼠RG的增生抑制作用.眼科研究2006;24(2):136139
2曹利群,刘敬,卢华,等.抗CD81抗体对培养大鼠RPE增殖性的影响.国际眼科杂志 2006;6(3):606608
3 Geisert EE, Abel HJ, Fan LY. Retinal pigment epithelium of the rat express CD81, the target of the antiproliferative antibody(TAPA). Invest
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4 Edwards RB. The isolation and culturing of retinal pigment epithelium of the rat. Vision Res 1981;21:147150
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6 Levy S, Nguyen VQ, Matthew L. Structrue and membrane topology of PATA1. J Bio Chem 1991;266 (22):1459714602
7 Gesbert LC, Naour LF, Binay LS. Functional analysis of four tetraspans, CD9, CD53, CD81 and CD82, suggests a common role in costimulation, cell adhesion and migration: only CD9 upregulates HEEGF activity. Cell 1997;182:105112
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9 Kelic S, Levy S, Suarez C. CD81 regulates neuroninduced astrocyte cellcycle exit. Mole Cell Neurosci 2001;17:551560
10 Geisert EE, Robert WW, Geisert GR. Increased brain size and glial cell number in CD81null mice. J Comp Neurol 2002;453:2232
11 Penas AF, Garcia AD, Sanchez FM. Tetraspanins are located at motilityrelated structures and involved in normal human keratinocyte wound healing migration. J Invest Derma 2000;114(6):11261135 上一页 [1] [2] |
