3讨论

     研究认为，PVR是眼组织对创伤修复反应的一种过度增殖的结果，其基本病理过程是原发性视网膜脱离或眼球穿通伤后的炎症反应，宿主细胞的游走、增生、膜形成，增生膜与视网膜粘连和收缩，形成对视网膜的牵拉，引起牵拉性视网膜脱离。细胞迁移、增殖、收缩是形成PVR的关键病理过程，抑制这些病理过程的发展可防止PVR的形成。Ca2+作为细胞的第二信使及细胞增殖的启动因子，其浓度的变化对细胞生长及有丝分裂具有调控作用，同时第二信使Ca2+的变化是PVR发病机制之一[7]。国外研究发现降低细胞内Ca2+浓度可抑制RPE细胞增殖[8]，我们的前期工作已证明hRPE细胞冷冻后细胞内Ca2+浓度明显增高，因此推测细胞内游离Ca2+浓度的增高可能是hRPE细胞迁移和增殖的机制之一[9,10]。我们应用80mg/L Ver作用体外培养的hRPE细胞，AO荧光染色、透射电镜和流式细胞术检测，可见典型的凋亡改变，而且随着作用时间延长，细胞凋亡百分比逐渐增高，表明一定浓度Ver可诱导hRPE细胞凋亡。

     同时为研究hRPE细胞凋亡与细胞内[Ca2+]i关系，应用Fluo-3/AM荧光探针测定凋亡过程中hRPE细胞内[Ca2+]i的变化。Fluo-3/AM是新一代钙离子荧光染料，它在可见光谱激发，激发波长488nm，因而减少了需紫外光作激发时对活细胞的光损伤，其与Ca2+结合式的荧光强度较游离形式高40～100倍。因而避免了自发荧光的干扰。Fluo-3与Ca2+亲和力低，容易解离，适合测定细胞内Ca2+的快速、微量变化。Rosenthal等[11]在培养不同物种的RPE细胞时发现，RPE细胞膜上存在电压依赖Ca2+通道，而且这种离子通道为典型的L型通道，Himpens等[12]在培养hRPE细胞时探讨Ca2+信号转导机制，认为RPE细胞内及细胞膜之间均有Ca2+流的改变，hRPE细胞这种典型的L型通道对Ver敏感。结合本研究结果，Ver阻断了hRPE细胞的L型通道，降低细胞内[Ca2+]i，引起细胞内钙平衡破坏，进而诱导hRPE细胞凋亡。[Ca2+]i的变化可能是hRPE凋亡的关键信号，同时凋亡的产生也可能涉及其他信号系统，尚待进一步实验来证明。

     Ver是一种可靠的慢钙通道阻滞剂，降低细胞内[Ca2+]i，而且抑制体外培养hRPE细胞增殖[13]。本研究选用Ver作用体外培养的hRPE细胞，发现Ver能诱导hRPE细胞凋亡，同时发现细胞内[Ca2+]i的变化可能是hRPE细胞凋亡的关键信号。如能将此药物应用扩展到诱导凋亡，且作用于眼内RPE细胞，具有较好的发展前途。

    【参考文献】

1 Minihan M, Tanner V, Williamson TH. Primary rhegmatogenous retinal detachment: 20 years of change. Br J Ophthalmol ,2001;85(5):546-548

2 Campochiaro PA. Pathogenic mechanisms in proliferative vitreoretino- pathy. Arch Ophthalmol ,1997;115(2):237-241

3 Kuriyama S, Ohuchi T, Yoshimura N, Honda Y. Growth factor-induced cytosolic calcium ion transients in cultured human retinal pigment epithelial cells. Invest Ophthalmol Vis Sci ,1991;32(11):2882-2890

4 Richter D, Hatvani I, Toth A. Growth inhibition of intraocular proliferative explants under in vitro conditions by verapamil. Klin Monatsbl Augenheilkd ,1993;203(3):206-211

5胡诞宁.眼科细胞培养的特殊技术.中华眼科杂志,2003;39(5):312-316

6王琳,惠延年,王雨生.人视网膜色素上皮细胞的冻存与复苏培养.中华眼底病杂志,1997;13(3):157-159

7 Smith-Thomas L, Haycock JW, Metcalfe R, Boulton M, Ellis S, Rennie IG, Richardson PS, Palmer I, Parsons MA, Mac Neil S. Involvement of calcium in retinal pigment epithelial cell proliferation and pigmentation. Curr Eye Res ,1998;17(8):813-822

8 Hoffman S, Gopalakrishna R, Gundimeda U, Murata T, Spee C, Ryan SJ, Hinton DR. Verapamil inhibits proliferation, migration and protein kinase C activity in human retinal pigment epithelial cells. Exp Eye Res ,1998;67(1):45-52

9洪晶,吴景天.低温冷冻对培养的人RPE细胞内CAMP及Ca2+浓度的影响.中华眼科杂志,1998;34:62-64

10洪晶,吴景天.地塞米松对低温冷冻后人视网膜色素上皮细胞游离Ca2+浓度的影响.中华眼底病杂志,1997;13:86-88

11 Rosenthal R, Strauss O. Ca2+-channels in the RPE. Adv Exp Med Biol ,2002;514:225-235

12 Himpens B, Vereecke J. Intra- and intercellular Ca(2+)-signal transduction. Verh K Acad Geneeskd Belg ,2000;62(6):501-563

13余建洪,赵刚平,邢怡桥.维拉帕米对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖和DNA合成的影响.国际眼科杂志,2005;5(2):232-234

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