王永强 严宏

第四军医大学唐都医院眼科 陕西省西安市 710038

目的 分离与鉴定早期被地塞米松攻击的晶状体蛋白质。

方法 2月龄雌性新鲜的大鼠晶状体共42只，分为3组，对照组与不含地塞米松的培养液孵育，实验组与含荧光标定的地塞米松培养液（浓度5 μM、10 μM）孵育；每天随机从各组取2只晶状体制作冰冻切片，荧光显微镜下观察晶状体切片荧光强度，找出大鼠晶状体孵育的最佳浓度和时间。2月龄雌性大鼠新鲜晶状体各50只分别与荧光标定的地塞米松（10 μM）孵育3 d和5 d，对照组50只与不含地塞米松的培养液在相同的条件下孵育，晶状体蛋白匀浆，凝胶过滤层析（Sephacry S-300HR）分离水溶性蛋白质，紫外分光光度计和荧光光度计分别测量所收集晶状体蛋白质组份280nm 的光吸收值和荧光强度（INT）值，绘制洗脱图及INT值曲线。荧光含量较多的蛋白质组份为地塞米松攻击的主要蛋白质组份，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和鉴定荧光含量多的蛋白质组份，并对该组份中高含量的晶状体蛋白质进一步进行MALDI-TOF肽质谱指纹图分析，以期确定早期被地塞米松攻击的晶状体蛋白质，并试图找到地塞米松与晶状体蛋白质的结合位点。

结果 10 μM组晶状体在孵育3 d时开始表现出不同的荧光强度，至7 d时晶状体冰冻切片表现强荧光。蛋白质色谱图及INT值曲线显示α- 晶状体蛋白对应的INT值较高，而β和γ-晶状体蛋白对应的INT值很低。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示实验组的蛋白质条带增多， MALDI-TOF肽质谱指纹手术图分析该系列蛋白质为αA-晶状体蛋白，提示地塞米松攻击的主要蛋白质是αA-晶状体蛋白。

结论 荧光素可作为地塞米松的示踪剂应用在早期被地塞米松攻击的大鼠晶状体蛋白质的分离与鉴定实验中。早期地塞米松攻击的晶状体蛋白质主要是αA-晶状体蛋白。α-晶状体蛋白被地塞米松修饰而导致其功能的降低，可能在激素性白内障的发病机制中起重要作用。