丁莉莉 魏锐利 蔡季平 李由 岳岩 上海第二军医大学附属长征医院眼科 上海 200003

    目的 研制新型嵌合血管抑制剂VEGI+蛋白。

    方法 设计特异性引物，通过PCR方法获得VEGI与寡肽CTTHWGFTLC相嵌合的融合基因VEGI+，将 PCR产物克隆至pGEM-T载体中，经酶切及测序鉴定后，与原核表达载体pET30a(+)重组，转化大肠杆菌BL21并诱导表达，His-Ni++金属鏊合柱对表达产物纯化。采用SDS-PAGE 电泳及Western-blot对表达产物进行鉴定。

    结果 酶切鉴定及测序结果表明，构建的融合基因VEGI+与预期结果相符；SDS- PAGE 电泳及Western blotting结果表明，嵌合蛋白VEGI+的分子量为23KD左右，纯化后VEGI+蛋白的纯度约90%。

    结论 成功的构建了重组表达载体pET30a-VEGI+，并在大肠杆菌诱导表达，亲和层析纯化后获得纯度较高的嵌合蛋白VEGI+。为进一步研制开发新一代抗肿瘤的血管抑制剂奠定了基础。

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