郝晓凤 惠延年 张鹏

第四军医大学西京医院眼科 全军眼科研究所 西安 710032

目的 观察Rac1和HIF-1a在缺氧的人RPE细胞及激光诱导的小鼠CNV模型中的表达，探讨二者在CNV 发生过程中的作用。

方法 （1）在含有200μM CoCl2的培养液内分别培养人RPE细胞0、0.5、1、2、4、8、 12和24 h，建立人RPE细胞胞内化学缺氧模型。用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测缺氧不同时间Rac1和HIF-1a的表达。（2）用532nm激光诱导小鼠CNV模型，分别在光凝后1、3、7、14、28 d 行荧光素眼底血管造影后处死小鼠，摘除眼球行病理切片观察及免疫组织化学检测Rac1和HIF-1α蛋白在 CNV 组织中的表达。

结果 （1）RT-PCR结果显示：常氧状态下，RPE细胞内Rac1 mRNA 表达呈阴性，缺氧早期RPE细胞内即有Rac1 mRNA的表达，且呈时间依赖性，缺氧4h达到高峰，与常氧组对照具有显著差异(P<0.05)；Western blot检测结果显示：常氧状态下RPE内未发现Rac1的表达，缺氧1 h可见弱表达，2 h明显上升，8 h达到高峰，随后开始下降。用Sigma Gel 1.0和Sig ma Plot 4.0软件对Western blotting结果进行分析后显示：缺氧2、4、8和12 h组Rac1灰度分别是1 h组的2.1、3.2、3.8和2.8倍，经SNK-q检验后发现，2 h和12 h之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)，其余各组之间两两比较的差异均有统计学意义 (P＜0.05)；免疫细胞化学方法显示：缺氧条件下RPE细胞早期即有Rac1和 HIF-1α的表达，Rac1主要位于胞浆，随着缺氧时间的延长，阳性表达量上调，在8 h达到高峰，12 h开始下降。与常氧组对照，具有显著性差异（P<0.05），同Western blot检测结果相符。HIF-1α位于胞浆和胞核，缺氧12 h 达到高峰，24 h 下降。与常氧组对照，具有显著差异（P<0.05）。且二者表达呈显著正相关（r=0.985,P<0.05）。（2）激光诱导的小鼠 CNV 组织形成过程中均有 Rac1和 HIF-1α 蛋白的表达，激光光凝早期二者表达均增高，激光照射后3和7 d 均达到高峰，Rac1 蛋白的阳性表达率分别为 34.58%和53.35%，而 HIF-1α 蛋白的阳性率为33.05% and 50.35%。光凝 14 d 时二者的表达均下降，阳性率分别为25.50% and 31.97%，二者表达呈显著正相关(r＝0.943 ，P =0.016)。

结论 （1）Rac1 和 HIF-1α 在早期缺氧的RPE细胞中呈瞬时高表达，可能与 CNV 的形成有关，且二者之间存在显著正相关性，Rac1 的表达峰值早于 HIF-1α 的表达峰值，表明Rac1 对缺氧的 RPE 细胞表达 HIF-1α可能具有调控作用。（2）Rac1和 HIF-1α 在 CNV 组织中存在高表达，且二者表达密切相关，说明在 CNV 的形成过程中，Rac1和 HIF-1α 起着一定的作用。Rac1有可能成为早期CNV药物治疗的靶点。