谢琳1 贺翔鸽1 周新富2 马建洲1 伍亚民3

李云玉3 王永堂3

第三军医大学大坪医院眼科 重庆市 400042

目的 青光眼的病理基础是RGCs死亡、神经纤维丢失，高眼压是最危险因素之一，但降低眼内压仍有视神经萎缩发生。由于视神经等中枢神经系统是免疫特赦器官，保护性自身免疫的程度轻微，设想若增强之，可能减轻受损及其周围神经元继发性损害。最新研究表明，Nogo基因表达上调可促进神经元凋亡和死亡的发生。Nogo蛋白通过Nogo-66与神经元上NgR以特异性配体-受体式结合，发挥神经抑制作用。设想：阻遏Nogo-66是否能达到封阻Nogo蛋白发挥作用，从而促进神经元存活？为青光眼神经保护治疗提供新的思路。

方法 用532-二极管激光建立SD大鼠慢性高眼压青光眼模型；应用pET系统原核表达Nogo-66蛋白；制备蛋白疫苗，并接种SD大鼠；采用逆行荧光金(FG)标记RGCs，视神经髓鞘甲苯胺蓝染色，闪光视觉诱发电位(F-VEP)检查验证Nogo-66蛋白疫苗对SD大鼠慢性青光眼神经损伤的保护作用。统计学处理：以均数±标准差(x±SD)表示，采用SPSS13.0统计软件对计量资料进行t-检验分析，以P<0.05表示差异显著、P<0.01表示差异非常显著。

结果 通过眼压测量，逆行荧光金(FG)标记RGCs，视神经髓鞘甲苯胺蓝染色和闪光视觉诱发电位(F-VEP)检查证实该模型构建成功；Tricine-PAGE电泳、Western Blot蛋白免疫印迹、核酸和蛋白质N末端检测结果显示，表达 Nogo-66蛋白成功，高压液相色谱法(HPLC)检测蛋白纯度为98.85％±0.46；逆行荧光金标记RGCs证实，高眼压后2月，Nogo-66蛋白疫苗接种组平均存活率为88.92%±1.67%，较单纯模型组提高8.21%±4. 14%，两组比较P<0.05；6月时，疫苗接种组平均存活率为86.08%±1.57%，较单纯模型组提高9.13%± 5.48%，两组比较P<0.05；高眼压后6月，疫苗接种组视神经内有髓神经纤维单位面积密度明显增多，与单纯模型组比较P<0.05；闪光视觉诱发电位(F-VEP)证实，疫苗接种组AP1较同时相点单纯模型组AP1高、 P1峰潜伏期短，两组比较P<0.05。

结论 Nogo-66蛋白疫苗不仅可促进视网膜神经节细胞(RGCs)存活、减少视神经纤维进一步损害、而且使神经功能得到一定保护。分析认为，Nogo-66蛋白疫苗可能通过增强 T淋巴细胞介导的保护性自身免疫反应，或刺激神经营养因子的生成等途径，达到对慢性青光眼神经损伤的保护目的，为青光眼神经损伤保护研究提供新思路。