赵海生　吴楠　王一　曾玉晓　王艳华　王晓芹

第三军医大学全军眼科中心 重庆 400038

目的　观察LEDGFp52对RGC神经元特异性生长相关的基因和蛋白的调控情况，为LEDGFp52作为更有效的RGC生长因子候选分子奠定基础。

方法　在原代大鼠RGCs培养的基础上，将LEDGFp52(2×10-4g/L)和Ab-LEDGF(2.5×10-4g/L)加入RGCs的无血清培养基中，在LipofectamineTM2000介导下将Ad-LEDGFp52(2.5×10-4g/L)(3×10-4pfu/L) 和siRNA-LEDGFp52(6×10-4g/L)转染进RGC进行LEDGFp52基因和蛋白两个水平的正负双向调控实验，分别在处理后24h、48h、72h 和96h收集RGC提取总RNA,RT-PCR检测各时相点各组RGC中神经元特异性生长相关基因MAP-2、GAP-43、Thy1.1和NF-L在mRNA水平的表达；各对应时相点的细胞爬片固定后细胞免疫荧光化学技术检测MAP-2、GAP-43、Thy1.1和NF-L抗体双标的RGC相应蛋白的表达情况。分别采用BioRad公司的数字化凝胶成像仪自带的Quantity One程序进行基因水平表达的半定量分析， Lecia公司的扫描激光共聚焦显微镜自带的LSM510-Meta-Expert程序进行蛋白水平表达的半定量分析。

结果　LEDGFp52在基因和蛋白两个水平对RGC神经元特异性生长相关的基因和蛋白MAP-2、 THY-1.1、GAP-43和NF-L的表达均有显著的调控作用，表现为：正向调节MAP-2、THY-1.1、GAP- 43和NF-L基因表达升高，负向调节基因表达降低。LEDGFp52在基因和蛋白两个水平对RGC神经元特异性生长相关的基因MAP-2、THY-1.1、GAP-43和NF-L的表达调控的峰值在给予处理因素后48h。正向调控时的时相－效应曲线表现为波伏状，调控效应显著；负向调控时的时相－效应曲线平缓。

结论　 LEDGFp52可显著调控RGC神经元特异性生长相关的基因和蛋白MAP-2、THY-1.1、GAP-43和NF-L 的表达，是RGC维持正常生长所必需的。LEDGFp52是RGC轴突局部延伸因子，可作为更有效的RGC生长因子候选分子。