韩静 韩泉洪 惠延年 马吉献 刘玮
第四军医大学西京医院眼科 全军眼科研究所 陕西省西安市 710032
目的 研究外加电场对培养人视网膜色素上皮（human retinal pigment epithelial, hRPE）细胞移行、增生的影响及相关作用机制，探讨将电场的作用应用于引导细胞移行及移位生长的可行性，为促进视网膜损伤后RPE的修复提供新思路和实验依据。
方法 培养的hRPE细胞置于电场强度为8V/cm的直流电场中暴露4h，未受电场作用的细胞作为对照。显微摄像系统连续记录每隔15min细胞移行的变化图像，图像分析系统处理结果；于0.5h、1h、2h、4h采用激光共聚焦及免疫组织化学法分别检测细胞内肌动蛋白(actin)及ERK1/2的表达情况；停止电场暴露后细胞继续培养24h，分别对阴性对照、电场暴露4h、停止电场暴露后24h的细胞行AgNORs染色，图像分析染色结果。
结果 实验组细胞在电场作用1h内细胞胞体明显变长，细胞运动以长轴垂直于场线方向排列为主；0.5h后部分细胞开始向电场阴极方向移行，并随电场暴露时间延长此定向移行更为明显，对照组细胞形态及移行方向均未见特殊变化；hRPE细胞暴露于电场后，细胞中actin蛋白表达随电场作用时间延长而增加，表现为荧光染色强度的增强，且多集中分布于细胞胞浆内朝向电场阴极一侧；细胞中ERK1/2的阳性表达出现于细胞暴露于电场1h后，表现为免疫组化法染色细胞胞浆中浅棕黄色着染，并随电场暴露时间延长着色加深；对照组actin表达较弱，ERK1/2 表达不明显。阴性对照、电场暴露4h、停止电场暴露后24h的细胞AgNORs平均面密度（AgNORs面积与胞核面积之比）（％）分别为21.26±1.08、20.91±2.63和23.18±1.47。
结论 电场可诱导hRPE细胞的阴极方向定向移行，此作用与细胞内骨架蛋白结构改变和MAPK/ERK2信号传导通路的激活有关。停止电场作用后发生移行的细胞与未受电场作用的细胞相比仍然能够维持较高的增生能力，提示电场可能对hRPE细胞的正常生物学活性无显著影响。本研究为利用电场诱导hRPE细胞的移行提供了初步实验数据，为RPE损伤的修复开辟新思路。
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