孙堂胜 张卯年
解放军总医院眼科 北京 100853
目的 探讨转化生长因子β2（TGF-β2）对体外分离培养的兔视网膜色素上皮细胞（RPE）DNA合成增殖的影响。
方法 体外分离培养兔原代视网膜色素上皮细胞，采用第三代已纯化的细胞进行实验。本实验采用不同方法观测溶血磷脂酸（LPA）、TGF-β2以及LPA+TGF-β2对兔RPE细胞增殖及DNA合成的影响。采用MTT法绘制不同处理因素下RPE细胞的生长曲线，应用DNAzol消化方法进行细胞DNA 的提取，观测不同处理因素下细胞增殖程度及DNA合成的情况测定。同时对不同处理因素处理下的 RPE细胞进行形态学观察，比较其生长状态。
结果 经LPA作用的兔RPE活细胞观察具有以下特点：细胞生长稠密，增殖迅速，胞体呈长梭形，细胞克隆形成广泛，细胞生长具有一定规律性的走向。胞浆内色素颗粒较多，核呈圆形或椭圆形，多核细胞多见，核仁2~3个。血清组和无血清组中LPA皆可促进RPE细胞的增殖，与血清有明显的协同促进增殖的作用。血清组中LPA组细胞生长曲线高耸，倍增时间短，几乎不出现滞留期。无血清组生长曲线则显平坦。LPA 在不同时间、有无血清存在的情况下皆可极显著地促进RPE细胞的生长，与对照组比较P值均＜0.01。同时极显著地促进RPE细胞DNA的合成，P值均＜0.001。经TGF-β2处理后的RPE活细胞形态特征是：细胞增长速度较LPA组明显变缓，细胞稀疏，体积增大，伪足少而短，几乎见不到细胞克隆形成，部分区域细胞呈长梭型，彼此交联。胞浆内色素颗粒不多，核呈圆形、椭圆形，境界清晰。核仁2－3个。从本实验结果进行分析显示，TGF-β2组早期即可明显抑制细胞增殖。TGF－β2组生长曲线皆显低平，滞留期和倍增时间均延长，在低增殖水平度过对数生长期，很快达到平台期。第三天时，LPA与TGF- β2在血清组细胞量方面出现了明显的拮抗作用（P＜0.01），而在DNA合成方面则不出现显著性差异，可能与血清的存在相关。在无血清组细胞量方面二者不显示明显的拮抗作用（P＞0.05）。在第七天时二者无论在细胞量还是DNA合成方面皆表现显著的拮抗作用。
结论 鉴于两者相互作用的规律，TGF-β2和LPA的比例失衡将直接对RPE细胞的增殖和分化活动造成影响，从而规定了PVR的发展方向。临床应用TGF-β2治疗PVR将可直接抑制RPE细胞的异常增殖活动和细胞外基质的形成，维持视路的透光性并减轻对视网膜可能造成的牵拉，从而大大改善了疾病的预后，为PVR的生物性治疗提供了可能。 |
