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人角膜内皮细胞分离方法的实验研究

http://www.cnophol.com 2009-3-18 14:24:53 中华眼科在线

    邵应峰1,2 陈家祺1 胡诞宁2
    中山眼科中心 New York Eye and Ear Infirmary

    【目的】对照研究三种不同的人角膜内皮细胞分离方法的效果,探讨快速、高效的人角膜内皮细胞分离采集方法。

    【方法】保存于Optisol中的角膜移植术后的残余的供体周边角膜(rim)12份,供体年龄均<20岁,供体死亡至细胞分离采集时间间隔<72小时,全部样本始终保存于4℃。将rim均分为三,将后弹力膜机械性剥离,分别使用三种方法分离亠10ngml bFGF和二抗的DMEM/F12(1:1)混合培养液,于37℃,含5%CO2的潮湿培养箱内进行培养。1周后进行细胞传代和计数。结果进行配对资料的t检验。

    【结果】A组:细胞部分爬出后弹力膜,在后弹力膜周围聚集生长,但后弹力膜表面仍有大量内皮细胞无法培养利用。B组:内皮细胞散在生长,后弹力膜表面仍有内皮细胞。C组:内皮细胞大多呈多处聚集生长,可见少量后弹力膜细小碎片。三组平均细胞计数分别为:4.6×104±0.6个,5.0×104个,6.1×104个,三组比较p值均小于0.01。

    【结论】三种人角膜内皮的分离方法均安全有效,其中贴皿法细胞爬出速度缓慢,且不充分。EDTA浸泡法可使大量内皮细胞从后弹力膜脱落,直接在培养皿底部生长,但后弹力膜表面仍有较多内皮细胞残留,无法培养利用。胶原酶消化法,可将后弹力膜全部或大部分消化,并且不对内皮细胞造成损伤,分离内皮细胞效果最为充分彻底。

    声明:本站独家报道,转载须标明来源“中华眼科在线”

(来源:中华眼科在线)(责编:duzhanhui)

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