角膜结膜及泪器病             797                                      AB0316

    以不同性质羊膜为载体培养人角膜缘干细胞后生物学特性研究

    刘蕾  洪晶

    中国医科大学附属第一医院眼科  110001

    目的：观察并比较在完整羊膜和去上皮层羊膜这两种不同性质的载体羊膜上培养的人角膜缘干细胞的生物学特性。

    材料及方法：培养用20个角膜缘组织均来自本院穿透性角膜移植术后的剩余角膜组织，供体眼球离体时间均小于12小时。羊膜组织均来自正常剖腹产获得的胎盘组织，其获取均得到产妇本人同意。试剂与仪器：DMEM/F12培养基粉剂，胎牛血清，鼠表皮生长因子EGF，AE5单克隆抗体，PCNA,CX43单克隆抗体，BrdU及其一抗，FITC标记的羊抗鼠及兔二抗。本研究采用组织块培养法，将角膜缘组织块种植于完整羊膜（I组）和去上皮层羊膜（D组）上进行培养，并对细胞的生长特点，超微结构以及免疫荧光染色结果进行观察。

    结果：在这两种性质的羊膜上人角膜缘干细胞均可生长形成单层，扫描电镜观察见细胞之间存在细胞连接。免疫荧光细胞化学染色结果显示：I组细胞BrdU标记阳性率高于D组，而对AE5和缝隙连接蛋白（Cx43）表达的阳性率低于D组，对增殖细胞核抗原（PCNA）阳性表达两组均较高。

    讨论：人角膜缘干细胞均可在这两种性质的羊膜上生长，但完整羊膜能更好得维持干细胞特性，更适合用于临床进行角膜缘干细胞缺乏疾病的移植治疗。

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